枇杷叶多糖的提取纯化、理化特征及生物活性研究

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枇杷叶(Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.Leaves)是一种传统的中草药,主要分布于我国华南及陕西、甘肃、台湾等地。具有治肺热咳嗽,阴虚劳咳的药效。目前,关于枇杷叶的研究多数集中于活性物质成分,枇杷叶多糖(PEL)均一组分结构的研究还不是很多。本文分为四个方面对枇杷叶多糖进行了较为全面的研究:枇杷叶多糖超声波提取的工艺优化、多糖的分离纯化、多糖均一组分的理化性质研究及枇杷叶多糖生物活性研究。采用响应面法得出超声波提取枇杷叶多糖的最优工艺条件为水料比21,超声功率380 w,提取时间42 min,此条件下枇杷叶多糖提取率达3.62%,有效的提高了枇杷叶多糖的提取效率。枇杷叶粗多糖经分级醇沉后得到三个组分PEL30、PEL60及PEL80。其中 PEL60 和 PEL80 经 DEAE Sapharose fast flow 阴离子交换柱和Sephacryl S系列凝胶柱层析分离纯化后,分别得到两个组分:PEL60A和PEL80A。经HPLC检测PEL60A为均一多糖组分,且平均分子量为269 kDa;而PEL80-A为不纯组分,含有分子量接近的相似组分。紫外全扫描结果显示两者均不含核酸和蛋白质。利用红外光谱分析PEL60A含有呋喃和吡喃糖苷构型的特征吸收峰。样品乙酰化处理化后,GC-MS分析表明其单糖组成主要为鼠李糖和阿拉伯糖,并可能含有少量的木糖和半乳糖。利用GC-MS分析及NMR谱(1HNMR、13C NMR)分析PEL60A的结构,结果表明其含有α-阿拉伯糖和β-鼠李糖构型,并含有乙酰基结构。枇杷叶多糖应用性的研究分为三个部分:对枇杷叶多糖抗氧化活性的研究表明,枇杷叶多糖具有较好的抗氧化活性,且经硫酸酯化后抗氧化能力有所提高;对枇杷叶多糖抗肿瘤活性的研究表明,枇杷叶多糖能有效抑制人肺腺癌细胞(A549)的体外生长,且对正常细胞几乎无毒副作用;在卷烟中的应用研究表明,枇杷叶多糖能提高卷烟的保润性,可作为新型保润剂。
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