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匹多莫德(pidotimod, Pido)是一种化学合成的,具有口服活性的免疫调节肽。研究表明,匹多莫德既能促进机体的非特异性免疫反应,也能促进特异性免疫反应,可广泛地应用于临床研究。巨噬细胞是一类重要的免疫效应细胞,近年来研究发现,机体微环境的改变会诱导巨噬细胞不同类型的极化。那么匹多莫德是否能够通过介导巨噬细胞极化,从而参与调节机体的相应免疫功能?因此,本研究首先以小鼠的原代骨髓巨噬细胞为研究对象,探讨匹多莫德对巨噬细胞极化及其功能的影响；在此基础上,进一步利用OVA致敏激发诱导的小鼠哮喘模型,研究了匹多莫德介导的巨噬细胞极化对小鼠哮喘疾病过程的影响；同时,以DSS诱导炎症性结肠炎小鼠为模型,探讨了匹多莫德对巨噬细胞极化的影响及其对DSS诱导结肠炎疾病的缓解作用,旨在进一步阐明匹多莫德对巨噬细胞极化及其功能的影响。主要研究结果如下：实验一：匹多莫德对小鼠原代骨髓巨噬细胞极化及功能的影响实验结果表明：(1)1-200μg/ml浓度Pido与原代巨噬细胞共培养,对巨噬细胞无毒性作用,并且不影响LPS/IFN-y诱导的M1型巨噬细胞极化；与IL-4诱导的M2型巨噬细胞相比,不同浓度Pido与IL-4共同诱导处理巨噬细胞后,显著提高了M2型特征基因Arg1Fizzl、Yml和MR的表达量p<0.05),说明Pido能够促进M2型巨噬细胞极化,其中1μg/ml的浓度促进效果最为显著。(2)与M2型巨噬细胞相比,1μg/ml Pido与IL-4共处理巨噬细胞12h和24h后,Arg1基因的表达分别提高2.23倍(p<0.01)和2.21倍(p<0.01)；处理6h后,Fizzl基因的表达量显著提高p<0.01),Yml基因在处理24h后表达量显著提高(p<0.001),12h后MR基因表达开始显著提高(p<0.001)；处理24h后,1000000个细胞中表达MR蛋白的细胞数量由0.433%提高到1.80%,证明匹多莫德能够显著促进1L-4诱导的M2型巨噬细胞极化。(3)与M2型巨噬细胞上清处理组相比,Pido处理的M2型巨噬细胞上清与MLE-12共培养后,细胞迁移率提高1.47倍(p<0.05)；Pido与IL-4共处理巨噬细胞后,MLE-12体外划痕愈合速率快于M2型巨噬细胞p<0.05),提示匹多莫德能够促进M2型巨噬细胞的修复功能。实验二：匹多莫德对小鼠支气管哮喘的影响本实验以C57BL/6小鼠为研究对象,建立了卵白蛋白(OVA)致敏激发的小鼠哮喘模型,比较了匹多莫德对哮喘小鼠呼吸道炎性细胞含量、血清抗体和细胞因子表达、肺组织炎症评分和气道黏液分泌、以及M2型巨噬细胞标记物免疫组化的影响,进一步探讨了匹多莫德对M2型巨噬细胞极化的促进作用与哮喘疾病之间的关系。实验结果表明：(1)灌胃Pido后,BALF中总炎性细胞数量呈上升趋势,嗜酸性粒细胞数量显著提高p<0.05),且这二项指标分别显著高于Dex治疗组p<0.05,p<0.01)；(2)哮喘建模同时灌胃Pido组,小鼠血清中IgE抗体水平显著高于Control组(p<0.001)、OVA组p<0.001)和Dex组p<0.001)；小鼠BALF中IL-4水平与Control组相比无差异(p>0.05),显著低于OVA组p<0.01)；与Control组,OVA组和Dex组相比,IL-5水平均显著提高(p<0.001)；IL-13水平显著高于Control组(p<0.01)和Dex组(p<0.05),与OVA组相比无统计学差异(p>0.05)；(3)单独灌胃Pido的哮喘模型小鼠,肺组织气道上皮不完整,上皮细胞明显增生肥大,气道周围可见炎症细胞和嗜酸性粒细胞浸润,炎症评分略高于与OVA组小鼠(p>0.05),但显著高于Dex组p<0.001)；模型小鼠灌胃Pido后,小鼠气道黏膜上皮可见大量杯状细胞,评分略高于与OVA组,但无统计学差异(p>0.05);(4)Pido组小鼠气道黏膜上皮Fizzl和Argl阳染颗粒多于Dex组(p<0.01,p>0.05)；与OVA组相比,在除气道黏膜上皮的部分外,肺部其他组织中也有Fizz1阳性着色颗粒(p<0.05)。Pido组小鼠气道黏膜上皮存在Arg1阳染颗粒,并且在肺部其他组织中能观察到Arg1阳性着色颗粒,其着色面积与OVA组类似。上述实验结果揭示,匹多莫德能够促进M2型巨噬细胞极化,进而可加重OVA诱导的哮喘小鼠疾病症状。实验三：匹多莫德对小鼠炎症性结肠炎的影响研究表明,M2型巨噬细胞能够调节机体Th1/Th2的平衡,从而对小鼠炎症性结肠炎具有保护作用。因此,本实验以C57BL/6小鼠为研究对象,建立了葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性结肠炎模型,比较过继回输M2型巨噬细胞和匹多莫德处理的M2型巨噬细胞后,对炎症性结肠炎疾病严重程度、血清细胞因子分泌和结肠组织病理的影响,进一步探讨了匹多莫德协同诱导M2型巨噬细胞极化与DSS诱导结肠炎的关系。实验结果表明：(1)与DSS建模组相比,尾静脉注射M2型巨噬细胞组和Pido处理的M2型巨噬细胞组,饮用2%DSS溶液后,小鼠体重降低幅度显著减小,体重减轻显著缓于M2型巨噬细胞组p<0.05),M2组和Pido处理M2组小鼠模型的疾病活动指数(DAI)均显著低于DSS模型组(p<0.001)。(2)过继回输M2型巨噬细胞和Pido处理的M2型巨噬细胞后,能够显著抑制DSS诱导血清炎症因子IFN-γ水平p<0.01,p<0.01),提高抑炎因子TGF-β1水平p<0.001,p<0.001)。(3) Pido处理M2型巨噬细胞的过继回输后,肠绒毛结构完整,排列整齐,肠黏膜腺体结构完整,粘膜层和粘膜下层少见炎症细胞浸润,病理评分显著低于DSS建模组和M0巨噬细胞回输组。上述试验结果表明,匹多莫德能够促进M2型巨噬细胞极化,从而缓解DSS诱导小鼠炎症性结肠炎的病症。综上所述,本试验初步揭示了匹多莫德协同诱导小鼠原代骨髓巨噬细胞的M2型极化,可增强M2型巨噬细胞的促细胞迁移和损伤修复功能,并通过OVA诱导的小鼠哮喘模型和DSS诱导的小鼠炎症性结肠炎模型,进一步验证了匹多莫德协同诱导M2型巨噬细胞的极化及其生理功能。