哈密瓜果斑病菌快速检测方法的建立

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哈密瓜细菌性果斑病在我国为新发生病害,其病原菌为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli),为害瓜果造成商品瓜的产量下降。近年来,果斑病的发生趋势有所上升,对我国哈密瓜生产造成严重威胁。哈密瓜细菌性果斑病菌为典型的种传细菌性病害,因此种子检疫成为防治此病害的重要手段。但常规的病种子检测方法大多存在时间过长、精度不高、专一性不强等缺点。有鉴于此,本研究建立了一套快速、准确、灵敏的检测方法,用于检测哈密瓜种子携带的病原细菌。 本研究配制了ASCM选择性培养基,用于果斑病菌的富集培养,同时抑制其他杂菌的生长;制备了果斑病菌的抗血清,并使用间接ELISA法模拟种子带菌检测:设计并合成了特异性的果斑病菌PCR检测引物,在模拟种子带菌检测实验中,菌体PCR的检测精度可达3×10~5CFU/ml;设计了Taq Man水解探针,并使用实时定量PCR对果斑病菌进行了检测,检测精度达到3×10~4 CFU/ml。成功地利用免疫超顺磁珠将免疫检测与PCR检测方法有机地结合起来,构建了IMS-PCR检测方法,并将检测精度提高到了3×10~2CFU/ml。 本研究最终将MOPS分离细菌、ASCM选择性培养基富集、免疫磁性分离与(实时定量)菌体PCR等技术融合成为一套种子带菌的快速检测方法(BIO-IMS-PCR),可成功地检测出1000粒(商品)种子中的一粒带菌种子,且信号较强。此检测方法的建立,为哈密瓜生产中检测细菌性果斑病,进而为防治该病提供有力的技术支持。
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