【摘 要】
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猫泛白细胞减少症（Feline panleukopenia,FP）,又称猫瘟,是一种高接触性、高致死性的传染病,在我国公共卫生和疾病的预防控制中受到广泛关注。当前我国FP疫苗及诊断制剂主要依赖进口,加上新冠疫情的影响,亟需自主研制的FP疫苗与诊断制剂。VP2蛋白是FPV衣壳的主要成分,在不同的毒株之间序列的同源性高,其形成的病毒样颗粒（Virus Like Particles,VLP）具有良好的免
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猫泛白细胞减少症（Feline panleukopenia,FP）,又称猫瘟,是一种高接触性、高致死性的传染病,在我国公共卫生和疾病的预防控制中受到广泛关注。当前我国FP疫苗及诊断制剂主要依赖进口,加上新冠疫情的影响,亟需自主研制的FP疫苗与诊断制剂。VP2蛋白是FPV衣壳的主要成分,在不同的毒株之间序列的同源性高,其形成的病毒样颗粒（Virus Like Particles,VLP）具有良好的免疫原性,能够很好地诱导体液和细胞免疫,并且能够刺激机体产生中和抗体。基于此,本文采用VP2自发形成的VLP制备FP亚单位疫苗,并制备针对VP2的单链抗体为FP诊断制剂提供材料。本实验将FPV标准毒株CU-4中的完整的VP2序列构建到原核表达载体p ET-28a上进行表达,全长VP2蛋白可以自组装成球状的病毒样颗粒。将全长VP2蛋白作为抗原制备亚单位疫苗,试验动物经免疫后,血清抗体效价达到0.6×10~5-1.2×10~5。用阳性临床样本中分离的毒株FPV-myzx和免疫后动物血清进行中和试验,发现免疫动物的血清PD50为5.55×10-3,可以抑制病毒对细胞的侵染。而后用FPV-myzx对动物进行攻毒试验,发现实验组3只免疫后动物其中2只未感染FPV,另1只感染动物在加强免疫后痊愈,疫苗保护率可达100%,实验组未免疫动物3只均感染FPV并快速死亡。提示以全长VP2蛋白制备的FP亚单位疫苗效果确实,这为FP基因工程亚单位疫苗的研发奠定了基础。从FPV的基因组学上来看,不同毒株之间的VP2基因序列同源性高,因此VP2蛋白同样可以作为免疫学诊断良好的病原检测靶标。本实验将全长VP2蛋白作为靶抗原,通过噬菌体展示技术成功地筛选到了目的单链抗体。将目的单链抗体基因片段构建至p TT5-human Fc真核表达载体上,使用HEK293F细胞成功地表达了重组抗体VP2Ab,并测得EC50=13.97 ng/m L,表明该重组抗体具有活性且亲和力好。这为FP免疫学诊断制剂的开发提供了材料。
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