B病毒是动物源性传染性疾病，在自然宿主（猴）中的感染率高（血清学阳性率为10%⁶0%），对人的致死性强（死亡率超过70%）；此外，B病毒属于生物安全4级病原，是潜在的生物战剂。因此，B病毒已成为实验猴质量和相关从业人员安全的严重威胁。当前，受困于B病毒基础研究的不足，准确诊断和有效防治一直裹足不前。有鉴于此，本课题以中国源猕猴的B病毒流行病学调查为基础，以诱导机体免疫应答的主要靶点——B病毒囊膜蛋白gC和gD为重点，以B病毒诊断和防治为目的，研究了B病毒在我国实验猴群中的流行病学特点；克隆表达了囊膜蛋白gC和gD基因，探讨了重组蛋白的诊断价值；制备和纯化了gC和gD的抗体，研究了抗体对病毒感染的影响；鉴定了gC和gD的抗原表位，为B病毒的防治奠定了基础。1．中国源猕猴感染猴B病毒的流行病学调查从四川、北京、海南、和广西收集的953份不同年龄阶段猴血清，检测血清中是否存在B病毒抗体。结果显示：344份血清抗体阳性，阳性率为36.1%；就实验猴群而言，不同猴群的B病毒感染率差异较大（最低为10.4%，最高为48.2%）；就年龄而言，1²岁龄猴群的抗体阳性率明显低于成年猴群（阳性率分别为18.4%和53.2%）。对13份B病毒抗体阳性猴的血清和三叉神经组织DNA进行PCR检测，结果显示：仅4份动物的三叉神经组织DNA样品为PCR阳性（30.8%）；扩增产物分析表明，gL基因的GC含量为64.1%，gD为74.2%，且gL的扩增条件和效果明显优于gD。说明B病毒感染猴后将在部分动物神经节中建立潜伏，而gL基因更适合作为分子鉴定的靶标。2．B病毒囊膜蛋白gC和gD的克隆、表达及诊断价值评价利用扩增的gC和gD基因，构建原核表达载体pET-28b（+）-gC和pET-28b（+）-gD，在IPTG诱导下获得大小约为46KDa以包涵体形式表达的gD重组蛋白；pET-28b（+）-gC未见目的蛋白表达。以优化后的gC基因密码子序列，获得约为50KDa的gC重组蛋白。利用重组蛋白gC和gD，通过ELISA反应条件优化，建立了血清抗体的ELISA检测方法。其中，重组蛋白gC和gD的最适包被量分别为150ng/孔和100ng/孔，待测血清稀释度为1:8¹0，兔抗猴IgG-HRP的工作浓度为1：30000。所建立的gC-ELISA敏感性和特异性分别为83.3%和100%，gD-ELISA为100%和90.0%；同比例混合gC和gD，敏感性可提高到100%，特异性为95.0%。3．猴B病毒囊膜蛋白gC和gD抗体制备及表位研究利用重组蛋白gC和gD免疫小鼠制备抗血清，同时采用亲和层析从B病毒阳性猴血清中纯化gC和gD抗体。细胞感染实验显示，只有gD抗体能抑制病毒感染，而gC抗体作用不明显。利用生物信息学软件分别在gC和gD蛋白上发现7、7个可能的抗原表位，合成表位肽段并经B病毒阳性血清证实，gD蛋白上的4个肽段(⁴⁶LPPLEQKTD⁵⁴、¹⁰⁶RGAPEATRSDA¹¹⁶、²⁹¹PELAPEERGTSRTPGD³⁰⁶和³⁶¹AVYLVRRRGR³⁷⁰)和gC蛋白上的3个肽段(³²STPAGRPGASRPGGVKRANR⁵¹、⁵³AAPARGRGSSNGTGPGSTSAQFRCRRPD⁸¹和²⁹⁸RDSVSFSRRNAT³⁰⁹)都能与阳性血清反应，表位肽的敏感性为40.0%⁸0.0%，特异性均为100%。