【摘 要】
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研究背景:血小板减少是化疗后最常见的临床表现之一,可导致重要脏器出血并危及生命,重症血小板减少患者预后差。血小板的生成不仅依赖造血干细胞,更依赖完好的骨髓微环境。化疗后患者骨髓微环境的破坏是化疗后血小板重建不良的原因之一,其中骨髓内皮祖细胞的损害更是血小板重建不良的独立危险因素。如何提高血小板数目、减少出血事件、缩短血小板重建时间是临床需要攻克的难题。目前临床治疗化疗后血小板减少的方法包括血小板的
【基金项目】
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2016年院长基金； 2017年省自然基金；
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研究背景:血小板减少是化疗后最常见的临床表现之一,可导致重要脏器出血并危及生命,重症血小板减少患者预后差。血小板的生成不仅依赖造血干细胞,更依赖完好的骨髓微环境。化疗后患者骨髓微环境的破坏是化疗后血小板重建不良的原因之一,其中骨髓内皮祖细胞的损害更是血小板重建不良的独立危险因素。如何提高血小板数目、减少出血事件、缩短血小板重建时间是临床需要攻克的难题。目前临床治疗化疗后血小板减少的方法包括血小板的输注,但血制品紧张以及血制品反复输注后抗体的产生限制了其应用。重组人血小板生成素（rhTPO）在化疗后血小板减少的治疗中临床应用广泛,并已证实有较好的疗效,既往公认的机制是rhTPO促进巨核细胞的分化、增殖以及成熟。本课题组前期研究表明rhTPO还可通过修复化疗后骨髓内皮祖细胞（BM-EPC）的增殖、成管、迁移等功能进而促进巨核细胞造血,但其中的机制尚未阐明。因此,本研究旨在探讨rhTPO对化疗后受损的BM-EPC功能修复机制。研究方法:一、骨髓内皮细胞的分离、培养及rhTPO对其功能的影响选取化疗30d后的血液病患者的骨髓标本,通过差速离心法分离获得细胞,将所得细胞进行培养及鉴定,通过对比rhTPO处理组和无rhTPO组成管实验、增殖试验以及迁移实验以研究rhTPO对骨髓内皮祖细胞功能的影响。二、rhTPO修复化疗后骨髓内皮祖细胞（BM-EPC）功能的机制研究通过Western-blot实验技术对比rhTPO组和无rhTPO组化疗后骨髓内皮祖细胞蛋白相对表达量的不同以探索rhTPO的作用通路。通过CCK8实验探索Src/Erk通路抑制剂FR18 0204以及PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对骨髓内皮祖细胞的影响,并寻求两种抑制剂的半抑制浓度（IC50）。比较用两种抑制剂IC50浓度处理后的骨髓内皮祖细胞的成管、增殖、迁移功能以验证rhTPO的作用通路。实验结果:1)rhTPO可修复化疗后骨髓内皮祖细胞的增殖、成管及迁移功能。2)rhTPO处理组的磷酸化AKT（N=6 P<0.05）以及磷酸化ERK（N=6 P<0.05）表达量较对照组增高,且具有统计学意义。3)FR180204 抑制剂对 BM-EPCIC50 为 40uM,LY294002 抑制剂的 IC50 为10uM,分别加入FR180204和LY294002抑制剂后rhTPO组BM-EPC增殖、迁移、成管功能均下降实验结论:化疗后骨髓内皮祖细胞功能受损,而TPO对其功能有一定的修复作用,其作用机制可能是TPO结合c-mpl受体,激活PI3K/AKT通路以及SRC/ERK通路,进而促进BM-EPC的增殖、成管以及迁移功能。
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