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目的 通过人子宫内膜细胞与鼠胚共培养,了解其对早期鼠胚体外发育的影响,依此来推论共培养的作用机制。从而为人类胚胎与自体子宫内膜细胞共培养的研究打下基础,为提高IVF-ET反复失败者的妊娠率的研究提供可行性分析。 方法 将来源于因输卵管因素要求行体外受精-胚胎移植的自愿患者的分泌早期的子宫内膜,用胰酶消化成单个细胞或细胞团块,经过培养、传代、冷冻保存、解冻复苏后接种获得冻融分泌早期单层子宫内膜细胞,并对其行免疫组织化学检查雌、孕激素受体的表达。将昆明小鼠2-细胞胚胎,分别与冻融(A组)和传代(B组)的子宫内膜细胞共培养以及对照组(C组)单一培养液,每24小时观察一次,并对胚胎进行形态学评分和凋亡检测,分析A、B组与C组之间各期胚胎的发育以及桑椹胚的凋亡情况。 结果 1.冻融后接种和传代的人子宫内膜细胞作免疫组织化学检查雌、孕激素受体,均呈阳性表达 2.共培养A、B组和C组对2-细胞胚胎培养24小时后,均有部分胚胎停滞于2-细胞期,持续观察24小时,发现停滞胚胎并不继续分裂,且各组异裂胚胎增加。C组与A、B组相比,2-细胞阻断有差异,而A组与B组之间无明显不同;三组之间异裂胚胎无差异。 3.共培养A、B组中鼠胚的4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚形成率及囊胚孵出率安徽医科大学硕士学位论文 明显高于对照组(C组);而A、B两组之间各期胚胎的形成率无明显差异。4.共培养A、B组8一细胞优质胚胎率分别占63.29%和62.79%,而对照组为45.27%, 三组之间有显著性差异;而A、B两组之间无差异。同时看到C组B类胚胎形 成率明显高于共培养组,即单一培养液培养组(对照组)胚胎的碎片多于实验 组(共培养组)。5,共培养A、B组8一C胚胎、桑堪胚的胚胎凋亡率低于对照组,差异有显著性, 且平均每个胚胎的凋亡细胞数也少于对照组。6.每组随机选择桑堪胚,进行去除透明带及分散卵裂球处理后,记数,算出平均 每个桑堪胚的细胞数,三组比较无差异。共培养组桑堪胚的细胞凋亡率明显低 于对照组,而共培养组之间无明显不同。结论1.人分泌早期子宫内膜细胞与鼠胚共培养,能明显改善昆明小鼠胚胎的2一细胞发 育阻滞。2.人分泌早期子宫内膜细胞共培养体系能有效的促进小鼠胚胎的体外发育,改善 胚胎质量。3.人分泌早期子宫内膜细胞能通过减少胚胎细胞的凋亡而促进胚胎的发育。