枸杞叶总黄酮的提取及其对染铅小鼠学习记忆的影响

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现代天然药物研究表明,枸杞叶中的总黄酮类物质具有很强的生物活性,如抗衰老、抗氧化、抗菌抗病毒、降血脂、抑制肿瘤生长等。近年来,总黄酮类物质是已经成为天然药物研究的热点。随着工业的迅猛发展,人类的生存环境面临着各种污染物的威胁,其中重金属铅的污染尤其严重。关于重金属铅对人体的神经毒害作用及其机制已有许多年的研究历史,排铅药物也不断地被研制出来用于铅中毒的治疗,但对于枸杞叶总黄酮类化合物对铅中毒损伤的恢复作用却鲜有报道。本文以小鼠为研究对象,腹腔注射醋酸铅建立记忆障碍模型,用枸杞叶中提取的总黄酮类化合物灌胃,通过Morris水迷宫分析系统及免疫组化实验研究小鼠学习记忆的功能变化,同时采血分离血清来考察其对小鼠体内自由基水平的影响。[目的]正交试验探究枸杞叶总黄酮最优提取条件,并测定不同月份采摘的枸杞叶的总黄酮提取得率;将枸杞叶总黄酮灌胃醋酸铅染毒小鼠,来考察其对小鼠的学习记忆修复与保护作用和对自由基代谢以及海马齿状回Bcl-2表达的影响。[方法]以单因素实验结果为基础设计正交试验,探究总黄酮提取最佳实验条件,标准品芦丁绘制标准曲线,制备出一定浓度的枸杞叶总黄酮溶液。以40mg/kg剂量腹腔注射醋酸铅溶液建立染毒模型,每日按高、中、低(50mg/kg、100mg/kg.200mg/kg)三个浓度水平分别灌胃枸杞叶总黄酮,连续6w给药后进行Morris水迷宫空间学习记忆训练与测试,取血清测量SOD与MDA水平,灌注小鼠取鼠脑部海马组织进行Bcl-2免疫组化实验。【结果】正交实验结果表明,在提取温度为85℃,提取次数为3次每次提取1h,乙醇浓度为65%的提取条件下,枸杞叶的总黄酮提取率达到最大。水迷宫检测结果显示总黄酮中浓度(100mg/kg)与高浓度(200mg/kg)组小鼠逃逸潜伏期显著少于醋酸铅对照组小鼠;总黄酮中浓度组SOD水平要显著高于(P<0.05)与醋酸铅对照组;总黄酮中浓度与高浓度组MDA水平要显著低于(P<0.05)醋酸铅对照组;通过对小鼠海马齿状回Bcl-2免疫组化阳性细胞计数,总黄酮高浓度组Bcl-2阳性细胞个数显著低于(P<0.05)醋酸铅模型组Bcl-2阳性细胞个数。【结论】灌胃一定浓度(100mg/kg,200mg/kg)的枸杞叶总黄酮具有改善染铅小鼠学习记忆能力损伤的作用;总黄酮对染铅小鼠具有增加超氧化物歧化酶(SOD)水平和降低丙二醛(MDA)水平的功效;枸杞叶总黄酮具有保护染铅小鼠海马齿状回神经细胞避免受铅诱导凋亡的功能。
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