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目的:构建乙脑病毒野毒株(SA14)及疫苗株/野毒株嵌合病毒株(SA14-14-2/SA14)感染性克隆,拯救病毒,比较重组乙脑野毒株和嵌合病毒株对小鼠的神经毒力及神经侵袭力,判断prM/E在乙脑病毒毒力中的作用。方法:采用分子克隆技术分别构建乙脑病毒野毒株(SA14)、嵌合病毒株(SA14-14-2/SA14)感染性克隆(全长cDNA质粒),并以此为模板,体外转录得到RNA,将RNA电转染导入BHK21细胞进行病毒拯救,用噬斑形成实验、间接免疫荧光技术及测序鉴定拯救病毒,比较重组乙脑野毒株及嵌合病毒株生长特点,并用重组乙脑野毒株和嵌合病毒株分别脑内和皮下接种昆明小鼠,比较重组乙脑野毒株和嵌合病毒株对小鼠神经毒力及神经侵袭力。结果:酶切鉴定表明感染性克隆构建成功,用间接免疫荧光技术检测到拯救病毒包膜蛋白表达,噬斑形成实验发现:野毒株噬斑直径最大,其次是嵌合病毒株,疫苗株噬斑直径最小。测序结果表明:拯救病毒与理论相符合。生长曲线表明嵌合株病毒在48h达到高峰后迅速下降,而疫苗株病毒和野毒株病毒均在60h达到高峰,整个观察期,野毒株病毒的滴度高于嵌合病毒和疫苗株病毒滴度。神经毒力研究发现:乙脑重组野毒株神经毒力(LD50)和神经侵袭力(LD50)分别为0.085 PFU/0.03mL和2.13 PFU/0.1mL,而嵌合病毒株神经毒力(LD50)和神经侵袭力(LD50)分别为4.72 PFU/0.03mL和39.5 PFU/0.1mL。结论:成功构建乙脑野毒株、嵌合病毒株感染性克隆并成功拯救病毒,嵌合病毒株神经毒力和皮下毒力皆略低于重组野毒株,但远高于疫苗株,表明:prM/E在病毒神经毒力和神经侵袭力控制中起着重要的作用,但非结构蛋白可能也起了一定的作用。成功搭建乙脑病毒的反向遗传学研究平台,为进一步研究乙脑病毒致病机制及乙脑疫苗减毒机制奠定基础。