包裹阿霉素的靶向微泡体外双模式成像及其在超声介导下促进SU-DHL-4细胞凋亡的研究

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目的:通过制备偶联利妥昔单抗,共载阿霉素和油酸修饰的超顺磁性氧化铁纳米颗粒的多功能靶向纳米微泡(RMBs),研究RMBs体外超声/磁共振双模式成像的效果,并研究RMBs在超声介导下对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中SU-DHL-4细胞株增殖及凋亡的作用。  方法:1、以“机械振荡法”制备共载阿霉素(DOX)和油酸修饰的超顺磁性氧化铁纳米颗粒(OA-SIOP)的纳米微泡(MBs),以“生物素-亲和素”连接法在MBs表面偶联利妥昔单抗,制备RMBs。激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)下观察DOX包裹及亲和素连接情况,扫描电子显微镜(SEM)及透射电子显微镜(TEM)下观察RMBs形态。粒径分析仪检测RMBs粒径,依据DOX浓度-OD值标准曲线计算RMBs中DOX包封率,观察RMBs稳定性,绘制RMBs中DOX在超声介导下随时间的释放曲线。2、体外超声(US)/磁共振(MR)成像观察RMBs增强US/MR显影的能力。3、LSCM下观察RMBs对SU-DHL-4细胞靶向性,采用CCK-8法评估RMBs合成材料及超声对细胞活性的影响。将SU-DHL-4细胞株分组处理48h,DAPI染色法观察各组干预对细胞密度及细胞核形态变化的影响,CCK-8法评估各组干预对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术(FCM)检测各组干预对细胞凋亡的影响。  结果:1、LSCM图像证实成功制备了RMBs,SEM及TEM图像显示RMBs呈规则球形,表面光整,分层结构清楚。RMBs粒径分布范围为(679.9±126.6)nm,Zeta电位分布范围为(-31.5±11.9)mV。RMBs中DOX的包封率为(27.31±0.47)%。RMBs有良好的稳定性。体外药物释放实验证实US可介导DOX从RMBs中释放。2、体外US成像时,随着RMBs浓度逐渐升高,超声图像灰度值逐渐增加,明显高于对照组,RMBs可作为US成像对比剂;体外MR成像时,含OA-SIOP的RMBs组T2WI信号随RMBs浓度升高逐渐减低,明显低于对照组,不含OA-SIOP的RMBs组T2WI信号各组无明显差异,载OA-SIOP的RMBs可作为MR成像阴性造影剂。3、SU-DHL-4细胞株的最佳细胞接种浓度为10×104/mL,DOX对SU-DHL-4细胞株的IC50为0.052μg/mL。RMBs有特异性靶向于CD20阳性的SU-DHL-4细胞的能力。RMBs有良好的生物安全性。各组干预48h后,RMBs联合超声组细胞密度降低及核碎裂最明显,细胞活力为(32.2±2.13)%,低于其他组,差异有统计学意义(p<0.05),细胞凋亡率为(46.43±2.50)%,高于其他组,差异有统计学意义(p<0.05)。  结论:本研究成功制备RMBs。RMBs体外US/MR成像时显示良好的对比效果,可以作为US/MR成像造影剂。RMBs在US介导下体外作用于DLBCL细胞,可明显抑制SU-DHL-4细胞增殖,显著诱导其凋亡,RMBs可能为DLBCL的治疗提供新方案。
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