介孔纳米颗粒和DNA纳米组装的Aptamer荧光传感器研究

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纳米组装技术是通过机械、物理、化学或生物方法,将纳米尺度上的基础单元进行组装,形成功能结构体系。基于纳米组装技术构建的核酸适配体传感器在在生物分析领域、分子成像领域、药物传递等方面具有广泛的应用,推动了生命科学、材料科学等领域的发展。但是大部分基于纳米组装技术构建的核酸适配体传感器设计过程复杂,制备过程繁琐,通用性不强。本文基于介孔纳米颗粒和DNA纳米组装发展了通用性强的核酸适配体荧光生物传感器。具体内容如下:1.基于介孔纳米颗粒发展了 一种免标记检测肌红蛋白的核酸适配体荧光生物传感器。首先肌红蛋白的核酸适配体(aptamer)将荧光小分子罗丹明6G封堵在介孔颗粒内,当存在目标物肌红蛋白时,由于介孔颗粒上的aptamer可特异性结合肌红蛋白而脱离介孔颗粒表面,进而释放介孔颗粒内的罗丹明6G,使溶液中荧光强度增强。结果表明荧光强度与肌红蛋白的浓度呈正相关,通过荧光强度的变化可实现对肌红蛋白的定量检测。该方法操作简便,能够免标记实现肌红蛋白的检测,检测下限低至1.1 nmol/L,且选择性好,可满足临床医学的检测要求。2.基于抗体和DNA自组装纳米材料发展了一种灵敏检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器。首先利用杂交链式反应(HCR),生物素和亲和素的相互作用制备了 DNA自组装的荧光纳米材料。当存在目标物肌红蛋白时,利用抗体捕获肌红蛋白,并与DNA荧光纳米材料形成“三明治”夹心结构,通过荧光强度的变化可实现对肌红蛋白的定量检测。该方法特异性好、灵敏度高,检测限低至约0.20nmol/L,并且实现了人血清中肌红蛋白的检测,有望发展成为一种通用的生物检测分析平台。3.基于DNA自组装纳米技术构建了多色荧光纳米探针,并对其进行了初步应用研究。首先利用HCR构建DNA自组装纳米探针,然后利用生物素-亲和素的相互作用将不同比例的荧光染料分子(荧光素、四甲基罗丹明和香豆素)掺杂到DNA纳米探针中。基于荧光染料分子间的荧光共振能量转移作用和aptamer的识别能力,构建了具有特异性的多色纳米探针。然后将其应用于肌红蛋白和C反应蛋白的分析检测,并初步实现了细胞的多色成像。该方法简便易行,有望发展成一种新型的可进行多目标检测的分析方法。
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