【摘 要】
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目的:验证八角枫丸剂的抗炎镇痛活性研究,并探讨八角枫丸剂对类风湿性关节炎的作用及机制研究,为八角枫丸剂提供临床药理学依据。方法:（1）通过热板法和扭体法研究八角枫丸剂的镇痛作用,通过二甲苯致耳廓肿胀和角叉菜胶致足趾肿胀研究八角枫丸剂的抗炎作用,以及检测角叉菜胶致足肿胀炎性组织中PEG2水平,测定各组小鼠血清中细胞白介素-6（IL-6）、细胞白介素-1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）
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目的:验证八角枫丸剂的抗炎镇痛活性研究,并探讨八角枫丸剂对类风湿性关节炎的作用及机制研究,为八角枫丸剂提供临床药理学依据。方法:（1）通过热板法和扭体法研究八角枫丸剂的镇痛作用,通过二甲苯致耳廓肿胀和角叉菜胶致足趾肿胀研究八角枫丸剂的抗炎作用,以及检测角叉菜胶致足肿胀炎性组织中PEG2水平,测定各组小鼠血清中细胞白介素-6（IL-6）、细胞白介素-1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。（2）40只雄性SD大鼠,造模成功后随机分为雷公藤多苷组（GTW,15mg/kg）、八角枫丸剂高剂量组（APCH,84mg/kg）、八角枫丸剂低剂量组（APCL,21mg/kg）、模型组（Model）,另设8只雄性SD正常大鼠作为空白对照组（Control）。各组大鼠连续灌胃给药4周（Control组和Model组大鼠灌胃给予5%CMC-Na）,每周观察大鼠的一般状态,测量大鼠足厚度、足容积、关节炎指数评分及足趾温度。于给药第29天,实验结束,大鼠腹主动脉取血,处死动物,取踝关节、滑膜组织、脾脏、胸腺;全自动动物血液分析仪检测各组大鼠血清样本中白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、谷草转氨酶（AST）的水平;ELISA法测定各组大鼠血清中炎症细胞因子细胞白介素-17（IL-17）、TNF-α、C反应蛋白（CRP）、IL-1β及氧化应激因子超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的水平;HE染色法对踝关节滑膜组织进行切片染色并观察病理变化情况;免疫组化法检测大鼠踝关节滑膜组织中TNF-α、NLRP3、IL-6、TLR4水平;实时荧光定量PCR测定大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3、IκBα、TLR4、IRAK1、NF-κB P65 m RNA的水平;Western Blot法测定大鼠踝关节滑膜组织中p-IκBα、IRAK1、p-NF-κB P65、NLRP3、TLR4蛋白表达水平。结果:（1）ACP能显著提高小鼠痛阈值、减少扭体次数,并且能有效降低小鼠耳廓肿胀度和足趾肿胀度,说明ACP具有良好的抗炎镇痛效果;ACP还能降低小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平及炎症组织中PGE2水平,说明ACP抗炎机制可能与降低炎症细胞因子水平有关。（2）与Model组比较,ACPH组大鼠足厚度显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;足容积和关节炎指数评分显示,ACP能显著降低足趾肿胀度和关节炎指数（P＜0.05或P＜0.01）,说明ACP对于胶原诱导性关节炎大鼠的炎症期间有一定的控制作用。（3）与Model组比较,GTW组和ACP各剂量组能显著降低CIA大鼠的脾脏指数和胸腺指数,差异均有统计学意义（P＜0.01）;ACP能升高CIA大鼠血清中ALT、TBIL水平（P＜0.05）,说明ACP对大鼠肝功能有一定的损伤作用。（4）与Model组比较,ACP能显著降低CIA大鼠血清中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-17、CRP水平（P＜0.05或P＜0.01）;ACP能显著升高CIA大鼠血清中氧化应激因子SOD、GSH水平（P＜0.01）,同时降低MDA水平（P＜0.01）。（5）HE染色结果显示,ACP能减少CIA大鼠踝关节滑膜组织中炎性细胞的浸润,减少滑膜细胞的增生,并且抑制血管翳的形成,能显著降低CIA大鼠病理评分（P＜0.01）。（6）免疫组化结果显示,ACP能显著降低CIA大鼠踝关节滑膜组织中TNF-α、IL-6、NLRP3和TLR4的相关表达（P＜0.01）。（7）实时荧光定量PCR结果显示,ACP能显著降低CIA大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3、IκBα、IRAK1、NF-κB P65、TLR4 m RNA水平至接近正常水平（P＜0.01）。（8）Western Blot结果显示,ACP能显著下调CIA大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3、TLR4、IRAK1、p-IκBα、p-NF-κB P65的蛋白表达（P＜0.01）。结论:通过热板法、扭体法、二甲苯致耳廓肿胀及角叉菜胶致足趾肿胀实验,说明八角枫丸剂具有良好的抗炎镇痛作用。八角枫丸剂能有效改善CIA大鼠关节炎症状,显著降低CIA大鼠血清中炎症细胞因子和氧化应激因子水平,对CIA大鼠踝关节滑膜组织的损伤有保护作用,其机制可能与抑制滑膜组织中NF-κB信号通路有关。
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