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目的:
脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是神经系统的常见疾病,具有发病率高、致残率高和死亡率高的特点,是影响人类生存及生活质量的最严重的疾病之一。出血后脑细胞的死亡方式包括坏死和凋亡两种,其中细胞凋亡作为一种基因调控的细胞死亡方式参与了脑出血后继发性脑损伤的病理过程,故进一步研究脑出血后细胞凋亡的规律和如何早期抑制细胞凋亡以促进神经功能的恢复对指导临床治疗有重要意义。本实验旨在探讨家兔脑出血后血肿区细胞凋亡的时程变化规律,早期微创血肿清除术干预治疗对细胞凋亡的影响及对神经组织的保护作用。
方法:选用健康雄性家兔60只,随机分成3组:正常对照组、脑出血自然恢复组和6h血肿清除治疗组。采用新鲜未肝素化自体血二次注入法制作脑出血模型。血肿清除治疗组:自体血注入4h后向血肿腔注入尿激酶,2h后实施微创血肿清除术清除血肿。各组家兔到相应的时间点(6h,12h,1d,3d,7d)行Purdy神经功能缺损评分,并处死动物开颅取脑。将取出的脑组织标本置4%多聚甲醛(Paraformaldehyde,PFA)中室温固定,按常规脱水后石蜡包埋,制备横断面7μm厚度切片。行脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end-labeling,TUNEL)染色检测细胞凋亡数。行Bcl-2、Bax免疫组织化学染色观察血肿周围凋亡相关蛋白的表达变化。光镜下4个高倍镜视野进行阳性细胞计数,所有统计结果采用均数±标准差(-X±S)表示,用SPSS13.0医学统计程序进行单因素方差分析f检验,通过Pearson相关分析计算神经功能评分与凋亡细胞计数结果的相关系数,P<0.05差异有统计学意义,P<0.01有显著性差异。
结论:
1.使用新鲜未肝素化自体血二次注入法可得到理想的脑出血模型。
2.脑出血后存在细胞凋亡,脑出血后长期的神经功能缺损可能与细胞凋亡有关。
3.脑出血后细胞凋亡与Bcl-2蛋自、Bax蛋自表达相关,Bcl-2早期表达降低以及Bax高表达是导致脑出血后细胞凋亡的重要因素。
4.早期微创血肿清除术干预治疗可能通过减少脑出血神经细胞的凋亡,来达到改善家兔脑出血后神经功能缺损的目的。