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目的：探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白5A(HCV NS5A)对干扰素α-2b诱导JAK-STAT信号传导途径中的STATl磷酸化及核转移的影响，以了解HCV NS5A相关的干扰素抵抗可能的分子机制。
研究方法：以干扰素α-2b 10000U／ml诱导Huh7细胞，测不同时间点(15min、30min、60min、2h、4h、8h)STATl磷酸化(Tyr701)状态，以磷酸化最明显时间点作为后续实验条件。 用脂质体Lipofectmine2000分别将p(表达HCV NS5A)和空质粒P导入Huh7细胞，另设一组未转染任何质粒为空白对照。转染后48小时开始以下实验：(1)应用免疫细胞化学技术检测HCV NS5A的表达。(2)用α—2b干扰素处理分别转染p和P<,RC／CMV>以及未转染三组细胞，条件为10000U／ml、37℃、5％CO<,2>孵育30min，免疫荧光法观察各组间干扰素诱导的STATl磷酸化和核转移有何不同；提取各组细胞总蛋白，通过蛋白印迹(Western Blot)方法比较各组磷酸化STATl(Tyr701)的表达量，进一步印证免疫荧光的结果。
结果：免疫细胞化学法显示转染了P<,CNS5A>质粒的细胞内有HCVNS5A表达，棕黄色颗粒分布于胞浆中。转染P组和未转染组细胞核STATl染色阳性(绿色荧光)，胞浆无荧光染色；转染P质粒组部分细胞的胞核为阴性而胞浆阳性，部分细胞的核阳性而胞浆阴性，说明IFNα-2b激活JAK-STAT信号传导途径，使游离于胞浆中的STAT1在短时间内转移至核内；而HCV NS5A抑制了IFNα诱导的STAT1核转移。我们进一步采用磷酸化STAT1(Tyr701)抗体进行免疫荧光实验，结果显示转染p组和未转染组细胞胞核染色阳性，胞浆无荧光染色；转染p质粒组部分细胞的胞核阴性且胞浆亦阴性，另一部分核内染色阳性而胞浆无染色，说明IFNα激活了JAK-STAT信号传导途径，使游离于胞浆中的STAT1在短时间内磷酸化且转移至核内；HCVNS5A能抑制IFNα诱导的STAT1磷酸化及核转移。Westem Blot检测IFNα诱导30min后各组细胞磷酸化STAT1(Tyr701)蛋白的表达，转染HCV NS5A表达质粒P的细胞磷酸化STAT1表达明显低于转染P组和未转染组，进一步印证了免疫荧光的结果。说明HCVNS5A对STAT1磷酸化存在抑制作用。
结论：成功的将HCV NS5A表达质粒瞬时转染至Huh7细胞；α-2b干扰素诱导STAT1磷酸化并且转移至细胞核内，这种效应可以被HCV NS5A抑制，这可能是HCV干扰素抵抗的分子机制之一。