猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus, PCMV)是一种以引起仔猪包涵体性鼻炎为主要特征的β疱疹病毒,幼龄猪群感染的死亡率可达25%。PCMV感染分布广泛,主要呈潜伏性感染,对养猪生产具有一定的危害。本研究应用PCR技术对临床收集的猪肺脏组织进行了PCMV检测,利用表达的PCMV糖蛋白B (glycoprotein B,gB)建立了ELISA方法,并对收集的猪场血清样本进行了PCMV抗体检测,了解我国猪群的PCMV感染状况；对PCMV分离毒株进行了全基因组序列测定,分析了病毒的基因组分子特征,以期为PCMV的分类提供科学依据；同时对PCMV的复制非必需基因进行了筛选和鉴定,为深入研究PCMV基因功能及分子病原学相关研究奠定基础。采用PCR技术,对2006-2010年收集自我国14个地区49个规模化猪场的812份肺组织病料进行了PCMV检测。结果表明,共检出317份阳性样本,PCMV阳性率为39.04%；猪场阳性率为97.96%。对随机选取的142份阳性扩增产物进行了测序,并与国外参考毒株序列进行比对。结果表明,扩增产物的核苷酸序列同源性为97.6%-100%,推导的氨基酸序列同源性为95.6%-100%。遗传演化分析显示,我国PCMV主要分属于亚群2和亚群3。上述结果表明,在我国猪群中PCMV感染较为广泛,病毒的DPOL基因存在一定程度的变异。利用原核表达系统对PCMV gB基因进行了表达,并用纯化的表达蛋白作为包被抗原建立了检测PCMV抗体的间接ELISA。应用ELISA对2009-2011年收集自14个地区27个猪场的1234份血清样本进行了PCMV抗体检测。结果显示,样本的PCMV抗体总阳性率为84.28%；猪场阳性率为100%；猪群抗体阳性率随日龄的增长呈逐渐上升趋势,母猪群的PCMV阳性率高达99.46%。血清学检测结果提示,我国猪群中PCMV的感染十分普遍。将PCR检测为PCMV阳性的猪肺泡巨噬细胞(Pulmonary alveolar macrophages, PAMs)与PT-K75细胞共培养,成功分离到1株PCMV,命名为BJ09。在PT-K75细胞上,该毒株感染可偶见合胞体和巨细胞病变。经透射电镜可见典型的PCMV粒子。用PT-K75细胞培养PCMV BJ09,提取病毒基因组DNA,用高通量测序方法对BJ09毒株全基因组序列进行了测定,并分析了该毒株的基因组特征。结果表明,PCMV BJ09的基因组全长为128367bp,预测的编码基因有79个；其中,69个基因与HHV-6A、HHV-6B和HHV-7具有同源性,2个基因与其它β疱疹病毒有同源性,而其余8个基因为PCMV特有；PCMV与HHV-6A、 HHV-6B和HHV-7同源基因的氨基酸同源性相对较高,且基因方向和位置均一致；PCMV基因组结构为DR-U-DR形式,与HHV-6A、HHV-6B和HHV-7相同；对PCMV核心基因的演化分析表明,PCMV与HHV-6A、HHV-6B和HHV-7处于同一分支。综上结果表明,PCMV可以作为一个新成员,归类于β疱疹病毒亚科的玫瑰疹病毒属。选择PCMV的22个基因,分别构建同源臂质粒。采用同源重组的方法,分别将EGFP表达盒插入22个基因的起始密码子中,并鉴定所获重组病毒的复制能力。结果显示,U24p、U26p、 U28.U70和U81对应的同源臂质粒与PCMV可发生同源重组,成功获得并鉴定出5株重组病毒,分别命名为rPCMV-U24p, rPCMV-U26p、rPCMV-U28、rPCMV-U70和rPCMV-U81,表明U24p、 U26p,、U28、 U70和U81为PCMV复制的非必需基因。综上所述,我们的研究结果表明,我国猪群中PCMV感染较为广泛；PCMV可归类于β疱疹病毒亚科的玫瑰疹病毒属；PCMV基因组的U24p、U26p、U28U70和U81基因是其复制的非必需基因。本研究的结果丰富了我国PCMV感染的流行病学数据,为PCMV的确切分类提供了科学依据。