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本论文采用数值分类、16SrDNAPCRRFLP、SDS-PAGE全细胞蛋白电泳、rep-PCR指纹图谱分析、系统发育分析、G+Cmol%测定及DNA-DNA同源性分析等技术对74株分离自我国亚热带地区的合欢、金合欢和银合欢根瘤菌进行了多相分类与系统发育研究,以了解我国合欢、金合欢和银合欢根瘤菌多样性,发现并保存新的、优良的根瘤菌种质资源。
生理、生化性状测定表明,部分菌株对一些抗生素的抗性可以达到300μg/ml;2株菌可以抗5%的NaCl;分别有2和22株菌可以在pH4.0和pH12.0的YMA平板上生长,大多数菌株在37℃下生长良好,23株菌可以抗60℃、10min的热冲击。
rep-PCR指纹图谱分析将供试菌株分成28个遗传群,表明供试菌株存在着较大的遗传多样性。rep-PCR分辩率更高,适合种以下水平的遗传多样性研究。
DNA-DNA杂交结果表明,数值分类群1和群2的菌株分别为A.tumefaciens和A.vitis,数值分类群3的代表菌株CCBAU61158与所处系统发育分支Mesorhizobium已知种参比菌株的DNA同源性均低于34.1%,为一个新种群Mesorhizobiumsp.(Albizia)。多相分类各方法表明数值分类群4、群5及菌株CCBAU35094和CCBAU35103应归为M.plurifarium,但这些菌株之间的DNA同源性为21.4%~85.2%,证实了M.plurifarium基因组存在极大多样性的报道(deLajudieetal.1994,1998;Wangetal.2003)。
综合以上结果得出如下结论:供试合欢根瘤菌存在较大的表型和遗传多样性,31株合欢根瘤菌分属于Mesorhizobium、Rhizobium和Bradyrhizobium三属8种,并发现一个新种群Mesorhizobiumsp.(Albizia);金合欢和银合欢对微共生体的选择具有共性,也有一定的偏好性,13株分离自银合欢的根瘤菌主要归于M.plurifarium和Sinorhizobium属,只有一株为慢生根瘤菌,归为B.elkanii,16株金合欢根瘤菌中有12株为慢生根瘤菌,分属于B.elkanii和B.yuanmingense两个种,其它为M.plurifarium。