近些年,寡糖的开发与应用得到国内外广泛的关注。而传统的直接提取和化学法在合成寡糖的过程中存在一定的局限性。葡萄糖苷酶被广泛用于合成寡糖,但都具有同时分解寡糖产物的缺点。分子生物学技术的兴起快速地推动了利用糖苷合成酶合成寡糖的研究,这种糖苷合成酶的构建是通过催化亲核体氨基酸变为非亲核体甘氨酸,使葡萄糖苷酶的原有水解活性丧失,只具有糖苷合成能力,从而使寡糖的合成量增加。目前关于嗜热古菌中的耐热糖苷合成酶合成寡糖的报道较少,这可以为以后开发寡糖工业化生产提供了可能。本试验以嗜热古菌Thermotoga neapolitana中的α-葡萄糖苷酶为研究对象,通过基因定点突变技术将α-葡萄糖苷酶的催化中心亲核体氨基酸置换为非亲核体甘氨酸,从而获得α-糖苷合成酶。通过有机合成制备出α-糖苷合成酶酶促反应的底物氟代吡喃葡萄糖,并尝试不同的糖基供体和受体来进行低聚糖的合成。通过正交试验对反应条件进行了优化,确定了分别以麦芽糖和α-PNPG为受体的最适底物浓度均为35 mM、最适酶量为0.06 mg/mL和0.04mg/mL、最适反应时间均为6 h。针对诱导表达α-葡萄糖苷酶的产酶量进行研究,通过对其进行诱导条件的优化,得到最佳D-乳糖醇诱导浓度为1.0 mM,诱导时间为7 h,诱导温度为34℃。确定D-乳糖醇是一种可以完全替代IPTG作为一种高效的以lac及其衍生物为启动子的基因工程重组蛋白的理想诱导剂。