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反刍动物瘤胃内甲烷气体的生成不仅降低了饲料的利用效率，而且对环境造成了不可逆转的影响，因此减少反刍动物甲烷气体的排放成为目前亟待解决的问题。本试验采用六氟化硫（SF6）示踪法及实时荧光定量技术，研究了粗饲料中玉米青贮和苜蓿干草的不同添加量对泌乳牛与干奶牛甲烷产量、瘤胃发酵模式及微生物菌群的影响，旨在探讨能否通过调控常用粗饲料的添加量，改变瘤胃内微生物菌群的比例及发酵类型，减少甲烷气体的生成。试验分别选用3头年龄、胎次相近的装有永久性瘤胃瘤胃瘘管的健康荷斯坦泌乳奶牛与3头荷斯坦干奶牛，在不同的试验期内接受三种不同的日粮处理（即A组玉米青贮10kg和苜蓿干草6kg、B组玉米青贮14kg和苜蓿干草4kg、C组玉米青贮32kg和苜蓿干草2kg）。3种试验日粮的精粗比均为50:50（DM基础），能量水平及酸性洗涤纤维含量一致，粗蛋白水平依次为15.13%、14.20%和13.32%，中性洗涤纤维含量依次为49.42%、51.36%、53.28%。试验共60天，每期20天，第1~14天为预饲期，第15~19天采集奶牛口鼻周围的气体，最后一天在不同时间点采集奶牛瘤胃液，分别测定瘤胃液的pH值、氨氮浓度、微生物蛋白含量及挥发性脂肪酸（乙酸、丙酸及丁酸含量），将每头奶牛各时间点采集的瘤胃液样品进行混合，离心后提取基因组DNA，采用荧光定量PCR技术测定瘤胃内产甲烷菌、真菌、原虫、产琥珀酸丝状杆菌、黄化瘤胃球菌及溶纤维丁酸弧菌相对于瘤胃总细菌16SrDNA的量。结果表明：1玉米青贮和苜蓿干草不同添加量对两种奶牛的甲烷产量均有显著影响（P<0.05），其中泌乳牛日粮B组甲烷产量分别比A组和C组低18.26%（P<0.05）和8.59%（P>0.05）；干奶牛日粮B组分别比A组和C组低21.20%（P<0.05）和8.79%（P>0.05）；但在饲喂相同日粮的条件下，泌乳牛与干奶牛甲烷日均排放量并无显著性差异（P>0.05）。2三种日粮对泌乳牛与干奶牛瘤胃发酵指标（丁酸除外）的影响显著（P<0.05）。其中A组日粮两种奶牛瘤胃内pH值、氨氮浓度、乙酸产量及乙丙酸比值均极显著高于日粮B组和C组（P<0.01）；丙酸产量较其它两组日粮极显著减少（P<0.01）；微生物蛋白含量较其它两组日粮显著降低（P<0.05）；三种日粮丁酸产量之间无显著性差异（P>0.05）。B组和C组日粮奶牛瘤胃内各项发酵指标间无显著性差异（P>0.05）。采食相同日粮，泌乳牛与干奶牛瘤胃发酵指标无显著性差异（P>0.05）。三种日粮条件下，奶牛不同时间点瘤胃内pH值、氨氮浓度、乙酸、丙酸产量及乙丙酸比值间均无显著性差异（P>0.05）。3随着日粮中玉米青贮添加量的增加，产甲烷菌、原虫、真菌、产琥珀酸丝状杆菌、黄色瘤胃球菌及溶纤维丁酸弧菌相对于总细菌16SrDNA的数量逐渐减少，即A组日粮奶牛瘤胃内这六种微生物数量最多，C组最少；3个日粮组产甲烷菌、原虫相对数量之间差异不显著（P>0.05），C组日粮泌乳牛瘤胃内真菌数量较前两组极显著减少（P<0.01）；3种日粮瘤胃内纤维降解菌（产琥珀酸丝状杆菌、黄色瘤胃球菌及溶纤维丁酸弧菌）的相对数量之间差异极显著（P<0.01）。不同生理阶段（泌乳牛与干奶牛）对奶牛瘤胃微生物数量无显著性差异（P>0.05）。综上所述，三组日粮组合中，玉米青贮及苜蓿干草鲜重添加为17kg:4kg时，泌乳牛及干奶牛瘤胃内发酵情况最优，甲烷排放量最低。