背景动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)曾被认为是一种不可逆转的病理过程，1970年，Amstrong报告恒河猴的重度AS在改饲低脂食物后明显消退。近年来的研究证明，在一定条件下，AS病变可以延缓或停止发展甚至逐渐消退。但在AS消退治疗领域仍存在许多重大问题：基础研究方面，AS消退的机制尚未阐明；治疗手段方面，已报告了多种具有抗AS作用的药物，大量研究结果均支持他汀类药物(stains)存在多效性作用，成为当前最有效的治疗AS的药物之一。然而，他汀类药物抑制AS发生发展的机理尚未完全阐明，另外，他汀类药物长期应用可产生明显不良反应，这在一定程度上限制了该类药物的临床应用。中医药具有多途径、多环节、多靶点治疗疾病且不良反应轻等特点，有可能在消退和稳定AS斑块方面发挥潜在的防治优势。近年来，多种中药已经被用于防治AS及其相关疾病，并显示出良好的作用，但中药与现代新型抗AS药物疗效的对比以及中药治疗的分子生物学机制尚无研究。本课题组初步研究结果显示，祛瘀消斑胶囊具有良好的消退和稳定AS斑块的作用，但该药抑制AS斑块的分子生物学机制及其与他汀类药物疗效的比较尚不明了。目的对比祛瘀消斑胶囊和辛伐他汀抑制动脉粥样硬化斑块的相对疗效，探讨两种药物抑制动脉粥样硬化的分子生物学机制。方法1．动物模型的建立：将67只雄性纯种新西兰兔随机分成正常对照组(A组)和球囊损伤+高胆固醇饲料喂养组。A组12只，给予普通颗粒饲料；球囊损伤+高胆固醇饲料喂养组55只，应用球囊损伤腹主动脉+高胆固醇饲料，喂养12周。于12周末随机从A组抽取2只兔作为正常验证组，处死后病理检查确认无AS形成；从B组随机抽取8只兔为AS验证组(B组)，处死后病理检查确认AS形成。2．干预方法：剩余45只AS模型兔停喂高胆固醇饲料，改喂普通饮食，随机分为3组，每组15只。C组为自然消退组；D组为中药组，给予祛瘀消斑胶囊1g／kg／d；E组为辛伐他汀组，给予辛伐他汀5mg／kg／d，持续12周。3．称量体重：实验前、12周造模后及24周末药物干预后分别对所有实验兔称量体重。4．血脂检测：分别于实验开始、12周末及24周末处死动物前采血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。5．高频体表超声检查：分别于实验开始、12周末和24周末处死动物前对实验兔进行腹主动脉体表超声检查，测量腹主动脉后壁内膜-中层厚度(IMT)、腹主动脉舒张末期内径(Dd)、动脉收缩末期内径(Ds)、收缩期血流峰值速度(Vp)、收缩期平均速度(Vm)和收缩期流速积分(VTI)。声学密度(AD)分析检测图像平均回声强度(AⅡ)，将内-中膜平均回声强度AⅡ-Ⅰ与外膜平均回声强度AⅡ-A的比值作为内-中膜校正的AD值(AⅡc％)，AⅡc％=AⅡ-Ⅰ／AⅡ-A×100％。6．血管内超声显像检查(IVUS)：分别于实验开始、12周末及24周末处死动物前进行三次腹主动脉血管内超声检查，测量血管外弹力膜面积(EEMA)、管腔面积(LA)、斑块面积(PA)及斑块负荷(PB％)。7．病理学检查：留取腹主动脉标本，进行油红O染色、苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色和Movat五色套染法染色。测量组织病理切片的纤维帽厚度和内中膜厚度，并计算纤维帽厚度／内-中膜厚度的比值。8．免疫组织化学染色：进行RAM11、α-actin和PCNA的免疫组织化学染色。9．电镜检查：应用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察血管超微结构的变化。10．RT-PCR：应用RT-PCR检测血管组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达水平。11．Western blot：应用Western blot检测血管组织中bFGF和TGF-β1的蛋白表达水平。12．统计学分析：连续性数据用(?)±SD表示，各组间指标的比较应用单因素方差分析。采用SPSS13.0分析软件(version13.0；SPSS Inc)进行统计学处理，P＜0.05具有统计学意义。结果1．实验动物基本情况：最终完成药物干预的实验兔共42只，其中C组14只，D组15只，E组13只。本文对A组10只、B组8只和完成药物干预的42只实验兔的资料进行分析。2．实验动物体重的变化：12周末A组体重由基础状态的(1.70±0.18)kg增至(2.69±0.22)kg，26周末增至(3.74±0.10)kg。B组体重基础状态为(1.71±0.17)kg，12周末增至(3.14±0.29)kg，体重增长幅度明显大于A组。各干预组治疗后体重均增加，26周末E组体重最高，为(4.02±0.15)kg，C组和E组体重显著大于A组(P＜0.01)，E组体重显著大于D组(P＜0.01)。3．血脂检测：各项血脂测值在12周造模后均显著升高(P均＜0.001)，其中以TC和LDL-C升高最为显著，TC由基础状态的(2.63±0.33)mmol／L升至(40.18+11.01)mmol／L，LDL-C由(1.77±0.29)mmol／L升至(33.29±9.87)mmol／L。虽然造模后HDL-C略有升高，但TC／HDL-C和LDL-C／HDL-C均显著增大(P均＜0.001)。治疗后各组实验兔各项血脂测值均显著低于AS造模后的血脂水平。与C组比较，辛伐他汀能显著降低血脂水平，降低TC 46.48％和LDL-C 49.61％(P分别＜0.05和0.01)。祛瘀消斑胶囊降低LDL-C 25.05％。E组的TC和LDL-C水平均显著低于D组(P均＜0.05)。E组的TG水平较C组和D组有所降低，但未达到统计学差异。4．体表超声和声学密度测值的比较：与B组或C组比较，D组和E组腹主动脉最大IMT显著降低(P均＜0.01)，其中E组的测值亦显著低于D组(P＜0.05)。各组间血流速度的各项测值无显著差异(P均＞0.05)。B组AⅡc％为63.24±7.01，C组为69.71±6.71，D组和E组分别升至76.71±7.07和83.38±8.18。与B组或C组比较，D组和E组AⅡc％显著升高(P＜0.05～0.01)，其中以E组的变化更为显著，且E组测值显著高于D组(P＜0.05)。5．血管内超声显像检查：B组与C组IVUS测值无显著差异。与B组或C组比较，D组和E组的PA和PB(％)显著降低(P＜0.05～0.01)，且E组PA和PB(％)测值显著低于D组(P＜0.05～0.01)。与B组比较，D组和E组EEMA均显著降低(P均＜0.01)，但C组、D组及E组间EEMA测值无统计学差异(P＞0.05)。各组间LA的比较无显著性差异(P＞0.05)。6．病理学检查：A组血管内膜薄且结构完整，B组可见腹主动脉脂质斑块弥漫或散在，内膜增厚，内皮不完整，泡沫细胞大量积聚。Masson染色见少量胞外胆固醇结晶和无定形坏死细胞碎片，绿色的胶原纤维组织增生不明显，表明成功地构建了AS稳定斑块的动物模型。C组见更多的纤维组织增生，D组和E组斑块厚度减小，泡沫细胞数目减少，体积减小，胞内脂肪空泡明显减少，纤维组织增生明显。油红O染色可见斑块的泡沫细胞内大量聚集的脂肪呈鲜红色，细胞核为兰色。腹主动脉病理学测量结果显示，B组和C组的各项测值无显著差异(P均＞0.05)。与B组或C组比较，D组和E组内-中膜厚度显著降低(P＜0.05～0.01)，纤维帽厚度以及纤维帽和内-中膜厚度的比值均显著升高(P＜0.05～0.01)，其中E组的变化更为显著，且E组纤维帽厚度以及纤维帽与内-中膜厚度的比值均显著高于D组(P均＜0.01)。7．免疫组织化学染色：免疫组织化学染色显示斑块内均有RAM11(巨噬细胞)、α-actin肌动蛋白以及PCNA的局部表达。与B组比较，C组、D组和E组腹主动脉斑块RAM-11的表达显著减少。与C组比较，D组和E组RAM-11的表达显著降低，且E组显著低于D组。B组与C组腹主动脉斑块α-actin表达的水平无显著差异。与B组或C组比较，D组和E组腹主动脉斑块α-actin表达的水平显著升高，而PCNA的表达显著降低。8．电镜检查：B组兔腹主动脉扫描电镜可见内皮细胞损伤明显，肌纤维排列紊乱。C组镜下改变与B组相似。D组和E组内皮相对光滑，肌纤维排列比较均匀整齐。透射电镜显示B组兔平滑肌细胞呈分泌型，排列紊乱，核形不规则，常染色质减少，异染色质增多，密斑和密体减少，分布不均匀，异染色质边聚。可见中膜平滑肌细胞向内膜迁移，胞浆中有大量增加的肿胀的线粒体，脂肪小滴明显增多，核异染色质边聚，常染色质呈团块状。C组平滑肌细胞破坏减轻，见轻度纤维增生。D组和E组细胞核为椭圆形，细胞间连接紧密，胞质中有丰富的肌丝和梭形的密体，异染色质轻微边聚。9．RT-PCR：与B组或C组比较，D组和E组bFGF的mRNA表达水平均显著降低(P＜0.05～0.01)，且D组显著低于E组(P＜0.05)。与B组或C组比较，D组和E组TGF-β1的mRNA表达水平均显著降低(P均＜0.01)，D组和E组间无显著差异。10．Western blot：与B组或C组比较，D组和E组bFGF和TGF-β1的蛋白表达均显著降低(P＜0.05～0.01)，且D组显著低于E组(P＜0.05)。结论祛瘀消斑胶囊和辛伐他汀均能消退实验兔动脉粥样硬化斑块；斑块内脂质和巨噬细胞的减少、细胞生长因子mRNA和蛋白表达降低及血管平滑肌细胞增殖的抑制是两种药物消退实验兔动脉粥样硬化的主要机制。背景心脑血管疾病是严重危害人类健康的疾病，导致急性心血管病事件的主要原因是动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)斑块破裂和血栓形成，后者取决于斑块的易损性。早期检出和积极治疗易损斑块对于预防和减少急性心血管事件具有极为重要的临床意义。深入研究易损斑块的发生机制、诊断技术和防治措施已成为近年来AS领域中一个新的研究热点。目前尚无一种理想的稳定斑块的药物。虽然基础研究证明，他汀类药物通过降低LDL和抑制斑块炎症可显著减少斑块内的脂质含量和炎性细胞，并增厚斑块的纤维帽，但Prove-It临床试验的结果仍显示，服用大剂量阿托伐他汀的治疗组两年后仍有22.4％的患者发生了急性冠状动脉事件。此外，服药后的肝功能异常使少数患者无法坚持用药。毒副作用少是传统中药的重要优点，从中药中寻找稳定斑块的有效药物，有可能为稳定斑块的治疗提供新的途径，但是，关于中药稳定易损斑块的研究尚未见系统报道。本研究旨在应用本实验室已经证实的易损斑块动物模型以及病理学、分子生物学、影像学等研究手段，力图阐明祛瘀消斑胶囊和辛伐他汀对于斑块易损性的影响，为中医药治疗易损斑块提供科学依据。目的(1)建立符合人类动脉粥样硬化病变特征、适于药物干预的易损斑块的动物模型；(2)应用血管内超声技术观察易损斑块的影像学特征，探讨血管内超声评价AS斑块动态变化的价值；(3)对比祛瘀消斑胶囊和辛伐他汀稳定易损斑块的疗效；(4)探讨两种药物稳定易损斑块的分子生物学机制方法1．动物模型的建立：48只雄性纯种新西兰大白兔均喂以普通颗粒饲料，经适应性饲养1周后，应用球囊损伤腹主动脉+高胆固醇饲料，造模期为12周。2．干预方法：47只动脉粥样硬化模型兔停喂高胆固醇饲料，随机分为3组。F组15只，喂以普通颗粒饲料；G组16只，加祛瘀消斑胶囊1g╱kg╱d；H组16只，加辛伐他汀5mg／kg╱d，持续12周。3．斑块局部的基因转染：24周末对3组实验兔进行斑块局部的基因转染，向转染部位的管腔中注入10μl携带人野生型p53基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad5-p53)，所有实验兔继续普通颗粒饲料喂养2周。4．药物触发：应用中国斑点蝰蛇毒(Chinese Russell’s Viper Venom，CRVV)和组胺于处死前24h、48h给予实验兔两次药物触发。26周末处死所有实验兔。5．称量体重：实验前、12周造模后及26周末药物干预后分别对所有实验兔称量体重。6．血脂检测：分别于实验开始、12周末及26周末处死动物前采血检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。7．血清炎性因子和血管功能指标的检测：别于实验开始、12周末、26周末处死动物前采血测定血浆纤维蛋白原(Fib)、血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、细胞间细胞黏附分子1(ICAM-1)、血管间细胞黏附分子1(VCAM-1)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的水平。8．高频体表超声检查：分别于实验开始、12周末、24周末药物触发前及26周末处死动物前对实验兔进行腹主动脉体表超声检查。测量腹主动脉后壁内膜-中层厚度(IMT)、腹主动脉舒张末期内径(Dd)、动脉收缩末期内径(Ds)、收缩期血流峰值速度(Vp)、收缩期平均速度(Vm)和收缩期流速积分(VTI)。声学密度(AD)检测图像平均回声强度(AⅡ)，将内-中膜平均回声强度AⅡ-Ⅰ与外膜平均回声强度AⅡ-A的比值作为内-中膜校正的AD值(AⅡc％)，AⅡc％=AⅡ-Ⅰ／AⅡ-A×100％。9．血管内超声显像检查(IVUS)：分别于实验开始、12周末及26周末处死动物前进行三次腹主动脉血管内超声检查。测量指标包括血管外弹力膜面积(EEMA)、)管腔面积(LA)、斑块面积(PA)和斑块负荷(PB％)。10．病理学检查：留取腹主动脉标本，进行油红O染色、苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色和Movat五色套染法染色。测量组织病理切片的纤维帽厚度和内中膜厚度，并计算纤维帽厚度／内-中膜厚度的比值。11．免疫组织化学染色：进行RAM11、α-actin、p53、ICAM-1、VCAM-1、MMP-9、TIMP-1以及MCP-1免疫组织化学染色。12．易损指数：脂质、巨噬细胞、平滑肌和胶原的量表示为染色阳性区域占斑块面积的百分数，易损指数=(RAM11+油红O)染色阳性百分比／(α-actin+胶原)染色阳性比值。13．电镜检查：留取标本进行扫描电子显微镜和透射电子显微镜检查，观察血管超微结构的变化并拍照。14．Real-time PCR：检测血管组织中p53、ICAM-1、VCAM-1、MMP-9、TIMP-1和MCP-1的mRNA的表达水平。15．Western blot：检测血管组织中p53、ICAM-1、VCAM-1、MMP-9、TIMP-1和MCP-1的蛋白表达水平。16．统计学分析：连续性数据用(?)±SD表示，离散数据用例数和百分数表示。三组间斑块破裂率的比较应用Pearson Chi-Square检验，其余指标应用单因素方差分析。应用SPSS统计软件进行统计学处理(version 11.0；SPSS Inc)，P＜0.05有统计学差异。结果1．实验动物基本情况：最终完成药物干预的共43只，其中F组15只，G组14只，H组14只。本文对完成药物干预的43只实验兔的资料进行分析。2．实验动物体重的变化：基础状态和12周末各组实验兔体重的比较均无显著性差异(P均＞0.05)，26周末G组体重较F组和H组显著降低(P分别＜0.05和0.01)，而F组和H组间体重无显著性差异。3．斑块破裂率比较：F组12只兔(80.00％)，G组6只兔(42.86％)和H组5只兔(35.71％)出现斑块破裂、血栓形成。与F组比较，G组和H组斑块破裂率均显著降低(P均＜0.05)。然而，G组和H组间斑块破裂率无显著差异。4．血脂检测：与F组比较，H组的各项血脂测值均降低，以TC和LDL-C降低最为显著，分别降低了38.84％和58.37％(P均＜0.01)；G组的各项血脂测值也均降低，但仅LDL-C的降低达统计学差异(P＜0.01)；H组的TC和LDL-C水平均显著低于G组(P分别＜0.05和0.01)；三组间TG和HDL-C水平无显著差异。5．炎症和血管功能指标：G组和H组血清hs-CRP分别为(88.25±23.69)ng／ml和(93.63±30.08)ng／ml，较之F组[(128.89±43.41)ng／ml]均显著降低(P均＜0.01)，而G组和H组间无显著性差异。与F组比较，G组sICAM-1显著降低(P＜0.01)，而H组血清sICAM-1水平无显著差异，且G组sICAM-1水平显著低于H组(P＜0.05)。与F组比较，G组血清sVCAM-1显著降低(P＜0.05)，H组sVCAM-1亦明显降低，近于达到统计学意义(P=0.052)，G组和H组间无显著性差异。与F组比较，G组和H组血清ox-LDL均显著降低(P分别＜0.01和0.05)，而且G组显著低于H组(P＜0.05)。与F组比较，G组和H组血浆纤维蛋白原水平均显著降低，但以G组的降低更为显著(P分别＜0.01和0.05)，而且G组显著低于H组(P＜0.01)。6．高频体表超声和声学密度检测：G组和H组腹主动脉最大IMT较F组显著降低(P均＜0.01)，而且H组显著低于G组(P＜0.05)；各组间血流速度各项测值无显著差异(P均＞0.05)。F组AⅡc％为75.58±7.56，G组和H组分别升至81.43±8.30和82.09±6.55。与F组比较，G组和H组AⅡc％显著升高(P均＜0.05)，G组和H组间测值无显著差异。7．血管内超声显像检查：IVUS定量分析显示G组和H组PA较F组显著降低(P均＜0.01)，且H组显著低于G组(P＜0.05)。G组和H组的EEMA均有降低的趋势，但只有H组与F组间有显著差异(P＜0.01)。与F组比较，G组和H组PB(％)均显著降低(P均＜0.01)，而后两组间无显著性差异。三组间LA的比较无显著性差异(P＞0.05)。8．病理学检查：三组实验兔主动脉内膜面见浅黄色斑块样突起，大小不等，散在或融合成片，与F组比较，G组和H组斑块面积及厚度均减小。斑块破裂处可见紧贴于动脉管壁的血栓，表面有血凝块附着。病理染色显示F组多数斑块破裂、血栓形成，脂质斑块弥漫或散在，内膜明显增厚，斑块内有泡沫细胞，伴少量胶原纤维增生。G组和H组斑块减小，泡沫细胞减少，纤维组织明显增生。腹主动脉病理学测量结果显示，与F组比较，G组和H组纤维帽厚度以及纤维帽和IMT的比值均显著升高(P分别＜0.05和0.01)，而IMT显著降低(P分别＜0.05和0.01)，而且H组的纤维帽厚度显著大于G组(P＜0.01)。9．免疫组织化学染色：免疫组化染色显示转染p53兔腹主动脉p53表达明显较之未转染兔明显增强。三组斑块内均有α-actin、RAM11、ICAM-1、VCAM-1、MMP-9、TIMP-1及MCP-1的局部表达，且这些因子在F组的表达量较其它两组明显增强。10．易损指数：与F组比较，G组和H组腹主动脉斑块巨噬细胞的表达及脂质染色阳性百分比均显著降低，而平滑肌细胞的表达及胶原的染色阳性百分比显著升高，易损指数显著降低(P均＜0.01)。与H组比较，尽管G组脂质染色阳性百分比显著高(P＜0.05)，且平滑肌细胞的表达及胶原的染色阳性百分比显著降低(P分别＜0.01和0.05)，但G组巨噬细胞的表达显著降低(P＜0.05)，两组间易损指数无显著差异。11．电镜检查：F组大部分实验兔发生腹主动脉斑块破裂、血栓形成，肌纤维排列紊乱，呈束状稀疏分布，有炎症细胞的浸润。G组和H组细胞核椭圆形，细胞间连接紧密，胞质中有丰富的肌丝和梭形的密体，异染色质轻微边聚。12．Real-time PCR：F组、G组和H组三组间p53 mRNA的相对表达量无显著差异。与F组比较，G组和H组腹主动脉ICAM-1、VCAM-1、MMP-9、TIMP-1和MCP-1的mRNA表达均较F组显著降低(P分别＜0.01～0.05)，其中G组VCAM-1的mRNA表达显著低于H组(P＜0.01)，而MMP-9和MCP-1的mRNA表达显著高于H组(P分别＜0.01和0.05)，两组间其余炎症因子的mRNA表达无显著差异。13．Western blot：F组、G组和H组三组间p53的蛋白表达无显著差异。与F组比较，G组和H组腹主动脉ICAM-1、VCAM-1、MMP-9、TIMP-1和MCP-1的蛋白表达均较F组显著降低(P分别＜0.01～0.05)，其中G组VCAM-1的蛋白表达显著低于H组(P＜0.01)，而MMP-9的蛋白表达显著高于H组(P＜0.05)，两组间其余炎症因子的蛋白表达无显著差异。结论(1)应用高脂饮食、内皮损伤、基因转染和药物触发的方法可建立符合人类AS病变特征、建模时间短、适于药物治疗干预的易损斑块的动物模型；(2)血管内超声技术是识别易损斑块的可靠手段，可用于观察AS斑块的动态变化及评价药物疗效；(3)祛瘀消斑胶囊和辛伐他汀均能稳定易损斑块，两种药物稳定斑块的净作用相似；(4)祛瘀消斑胶囊稳定易损斑块的主要机制是：降低血脂和血清炎症因子的水平、降低血浆纤维蛋白原和抗脂质过氧化、减低斑块局部的脂质含量和炎性反应；辛伐他汀稳定斑块的主要机制是：显著降低血脂及血清和斑块局部多种炎性因子的表达。背景动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种复杂的多因素疾病，最近研究表明，非感染性甚至感染性因素引起的炎症和免疫机制贯穿于AS的始终，免疫应答，包括天然免疫和获得性免疫，可能在AS斑块的进展和／或失稳中起重要作用。炎性细胞如T淋巴细胞和巨噬细胞在AS病变的进程中扮演了重要角色，血管内皮细胞、平滑肌细胞及外膜的成纤维细胞和肥大细胞均可作为免疫细胞产生促炎细胞因子。但是，炎症因子及免疫反应与AS在分子机制上的关系尚不明了，深入研究AS的炎症和免疫机制，探讨阻断AS的发病途径具有重要意义。Toll样受体(toll like receptors，TLRs)首先在果蝇中发现，是一种介导天然免疫的跨膜信号传递受体家族，属于模式识别受体(pattern recognition receptors，PRRs)，在细胞活化信号的转导中起重要作用，是联系天然免疫与获得性免疫的桥梁。到目前为止，哺乳动物中已有十余种确定的TLR家族成员，其中TLR-2和TLR-4在天然免疫和炎症反应中起重要作用。配体与TLR聚合活化后，级联式激活信号通路中相关因子的表达，最终导致转录因子NF-κB的激活和转位，引起一系列炎性细胞因子，如白介素6(IL-6)的合成和释放。这样，TLR介导的信号诱导了编码促炎因子的基因大量表达。越来越多的证据表明，TLRs，特别是TLR4，是免疫反应和慢性炎症、脂代谢紊乱之间的一个桥梁，有可能在AS过程中发挥重要的作用。深入研究TLR这一复杂的调控系统在AS发生、发展中的作用及其相关机制，不仅为我们进一步研究AS的发病机制提供了一个新的角度，而且在治疗、预防AS方面也提出了新的思路。深入研究中医药对TLR生物学特性及其调控机制的影响，从细胞和分子水平开展前瞻性的实验研究，有可能开发出靶点特异、高效的TLR拮抗药物，可望为AS中医药治疗及其机制研究提供新的切入点。综合国内外的研究现状，目前对TLR信号在AS中的作用的研究才刚刚开始，TLR／MyD88／NF-κB通路在AS发生和发展中的确切机制尚不明确，而且，这些有限的关于TLR的研究主要集中于AS稳定斑块，而对TLR／MyD88／NF-κB通路在AS易损斑块中变化机制的研究尚未见报道，还未见针对AS中TLR／MyD88／NF-κB通路的干预研究。本研究在综合分析AS研究动态和TLR细胞信号传导途径的基础上，探讨TLR／MyD88／NF-κB信号传导途径在AS易损斑块发病中的作用及干预措施，试图阐明该通路在AS易损斑块中变化机制，为AS的治疗提供新的靶点。目的(1)明确AS病变过程中TLR／MyD88／NF-κB途径的存在，从分子水平探讨该信号传导通路在易损斑块发生和发展中的作用；(2)评价祛瘀消斑胶囊和辛伐他汀对TLR／MyD88／NF-κB信号传导通路的影响以及临床干预易损斑块发生发展的可行性，为临床干预易损斑块提供新的靶分子。方法1．动物模型的建立：48只雄性纯种新西兰大白兔均喂以普通颗粒饲料，经适应性饲养1周后，应用球囊损伤腹主动脉+高胆固醇饲料，造模期为12周。2．干预方法：将剩余47只AS模型兔随机分为3组。F组15只，喂以普通颗粒饲料；G组16只，加祛瘀消斑胶囊1g／kg／d；H组16只，加辛伐他汀5mg／kg／d，持续12周。3．斑块局部的基因转染：24周末对3组实验兔进行斑块局部的基因转染，向转染部位的管腔中注入10μl携带人野生型p53基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad5-p53)，所有实验兔继续普通颗粒饲料喂养2周。4．药物触发：应用中国斑点蝰蛇毒(Chinese Russell’s Viper Venom，CRVV)和组胺于处死前24h、48h给予实验兔两次药物触发。26周末处死所有实验兔。5．免疫组织化学染色：进行TLR2、TLR4、NF-κB、MyD88、Fas、FasL以及IL-6免疫组织化学染色。6．Real-time RT-PCR：应用Real-time RT-PCR检测血管组织中TLR2、TLR4、NF-κB、Fas和IL-6的mRNA表达水平。7．Western blot：应用Western blot检测血管组织中TLR2、TLR4、NF-κB、MyD88、Fas、FasL和IL-6的蛋白表达水平。8．平滑肌细胞凋亡的检测：流式细胞仪检测平滑肌细胞的细胞周期的变化及细胞凋亡率的结果；原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测平滑肌细胞的凋亡率。9．统计学分析：数据用(?)±SD表示，三组间的比较应用单因素方差分析。采用SPSS13.0分析软件(SPSS Inc)进行统计学分析，P＜0.05具有统计学意义。结果1．实验动物基本情况：最终完成药物干预的实验兔共43只，其中F组15只，G组14只，H组14只。本文对完成药物干预的43只实验兔的资料进行分析。2．免疫组织化学染色：免疫组织化学染色显示斑块内均有TLR2、TLR4、NF-κB p65、MyD88、FAS、FAS-L及IL-6的局部表达。与F组比较，G组和H组腹主动脉斑块TLR2、TLR4及NF-κB的表达显著减少(P均＜0.01)，且H组显著低于G组(P均＜0.05)。与F组比较，G组和H组腹主动脉斑块MyD88、Fas、FasL及IL-6的表达显著减少(P分别＜0.01和0.05)，且H组与G组间无显著差异。3．Real-time PCR：与F组比较，G组和H组TLR2、TLR4、NF-κB p65、Fas及IL-6的mRNA表达水平均显著降低(P分别＜0.01和0.05)，且H组与G组间无显著差异。4．Western blot：与F组比较，G组和H组TLR2、TLR4、NF-κB p65、MyD88、Fas、FasL及IL-6的蛋白表达水平均显著降低(P分别＜0.01和0.05)，且H组与G组间无显著差异。5．平滑肌细胞凋亡的检测：流式细胞仪检测F组平滑肌细胞的凋亡率为15.60％±1.71％，G组为8.35％±1.29％，H组为6.31％±1.34％。与F组比较，G组和H组的细胞凋亡率显著降低(P均＜0.01)，且H组显著低于G组(P＜0.01)。结论(1)在AS易损斑块动物模型中证实了TLR/MyD88／NF-κB途径的存在，提示该途径与易损斑块发生和发展之间存在密切的相关性。(2)祛瘀消斑胶囊和辛伐他汀通过阻断TLR／MyD88／NF--κB信号传导通路中相关信号分子的过度激活，对易损斑块的发生和发展具有全面的干预作用。