【摘 要】
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磷酸烯醇丙酮酸：糖类磷酸转移酶系统(phosphoenolpyruvate:sugar phosphotransferase system, PTS)是一些微生物中主要的碳源转运途径之一。针对氧化葡萄糖酸杆菌621H (Glucon
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磷酸烯醇丙酮酸：糖类磷酸转移酶系统(phosphoenolpyruvate:sugar phosphotransferase system, PTS)是一些微生物中主要的碳源转运途径之一。针对氧化葡萄糖酸杆菌621H (Gluconobacter oxydans621H, G. oxydans621H)基因组序列分析发现,它可能包含编码PTS系统三种主要组成成分(EI. HPr和EIIA)的基因序列,但缺失了EII中作为通透酶成分的B和C功能区。本论文主要旨在研究这种假定的缺失型PTS系统在G. oxydans621H中的具体作用。在唯一碳源(葡萄糖/果糖)条件下对G. oxydans621H培养后进行RT-PCR发现,该菌在限制性条件下能够转录PTS系统中的相关基因,说明通过基因组分析所发现的相关序列并非假基因。随后,在获得G. oxydans621H中构成PTS系统的纯化蛋白(EI,HPr和EIIA)的基础上,对该多酶体系进行了体外磷酸化检测,但未能证实该系统的体外磷酸基团转移过程。此外,根据软件预测结果,推测该系统中的HPr蛋白可能存在三个磷酸化位点,其分别是His21, His25和Ser54。实验证明在G. oxydans621H中假定的HPr激酶对HPr具有磷酸化作用,并且其活性位点是HPr蛋白54位点的丝氨酸(Ser54)。本研究还尝试通过三亲本接合与Red重组的手段,对PTS系统的相关基因进行敲除,以研究其可能的生物学活性。
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