STAT3、MMP-2及CyclinD1在EGCG抗鼻咽癌细胞CNE2中的表达变化及意义

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目的:鼻咽癌是我国广东、广西及福建等南方地区的常见恶性肿瘤之一,目前其主要治疗方法是放疗加化疗等综合性治疗,但其5年生存率只有50%左右,晚期病人的治疗效果及生存时间更差。本研究旨在观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)体外对鼻咽癌CNE2细胞的生长影响,同时通过分析其过程中的STAT3、MMP-2、CyclinD1的表达变化,揭示EGCG抗鼻咽癌的机制,为开发与寻找新药以提高鼻咽癌的治疗效果提供实验依据。方法:1.实验室体外条件下培养鼻咽癌低分化细胞株CNE2,用不同浓度的EGCG(0、40、80、160mg/L)干预24h、48h、72h后,分别于倒置显微镜下观察CNE2细胞的形态学改变。2.使用不同浓度的EGCG作用CNE2细胞24h、48h、72h后,应用MTT法间接检测细胞增殖的变化,并计算其增殖抑制率。3.使用不同浓度的EGCG作用于CNE2细胞48h后,使用Hoechst33258染色观察细胞凋亡情况,并计算其凋亡率。4.应用Transwell细胞侵袭实验检测不同浓度EGCG作用后的CNE2细胞侵袭作用的变化。5.使用流式细胞仪检测不同浓度的EGCG作用鼻咽癌细胞株CNE2不同时间后对细胞周期的影响。6.逆转录PCR(RT-PCR)检测EGCG抗鼻咽癌细胞株CNE2过程中STAT3、MMP-2、CyclinD1的表达变化。结果:1.倒置显微镜下观察,发现CNE2细胞分裂相变少,部分细胞变圆,随着EGCG浓度的增加和作用时间的延长,培养瓶中出现越来越多的细胞漂浮及坏死的现象。2.MTT法检测结果显示,随着EGCG的浓度增加及作用时间延长,EGCG对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用不断增加,且呈浓度与时间依赖性(p<0.05)。3.Hochest33258染色结果显示,EGCG处理CNE2细胞后出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩等。与对照组比较,随着EGCG浓度的增加,凋亡细胞数不断增多(p<0.05)。4.流式细胞仪检测结果显示:不同浓度的EGCG(0、40、80、160mg/L)分别作用于CNE2细胞24h、48h后,停滞在G1/G0期细胞百分率分别为:(46.67±0.38)%、(55.20±0.33)%、(62.33±0.28)%、(68.65±0.40)%和(49.12±0.28)%、(57.73±0.45)%、(64.36±0.26)%、(69.62±0.33)%。与对照组比较,各实验组G1/G0期细胞百分率明显增加(P<0.05),各实验组两两比较差异显著(P<0.05),呈浓度与时间依赖性。5.不同浓度EGCG作用CNE2细胞后,Transwell细胞侵袭实验结果显示:随着EGCG浓度的升高,与对照组相比,CNE2细胞的侵袭作用呈浓度依赖性减弱(p<0.05)。6.逆转录PCR(RT-PCR)检测结果显示:CNE2细胞中STAT3、MMP-2、CyclinD1mRNA的相对表达量随着EGCG浓度升高与作用时间延长有降低趋势(P<0.05)。结论:1.EGCG呈浓度依赖性与时间依赖性下调STAT3mRNA的表达,这可能作为EGCG抗鼻咽癌的生物学作用机制之一。2.EGCG抑制CNE2细胞的侵袭作用,可能与其呈浓度依赖性与时间依赖性下调MMP-2mRNA的表达相关。3.EGCG抑制CNE2细胞的增殖,诱导其凋亡,可能与其呈浓度与时间依赖性下调CyclinD1mRNA的表达相关。
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