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目的:探讨survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体对HeLa细胞中stathmin基因表达的肿瘤特异性封闭作用。方法: (1)将合成的siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4.1-CMVneo真核表达载体,酶切及测序鉴定。脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选后RT-PCR检测其对stathmin基因mRNA的干涉效果。(2)PCR扩增suvivin基因启动子并测序,用EcoRI和BamHI分别双酶切,连接至经相同内切酶消化的载体,获得survivin启动子调控的siRNA真核表达载体,酶切及测序鉴定。脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选。RT-PCR扩增stathmin基因,检测其对stathmin基因表达的干涉效果;流式细胞仪分析转染后Hela细胞增殖周期的改变。结果: (1)经酶切及测序鉴定,成功构建了CMV启动子调控的siRNA真核表达载体。经脂质体转染HeLa细胞后,RT-PCR结果显示HeLa细胞中stathmin基因的mRNA表达水平明显降低。(2)经酶切及测序鉴定,成功构建了survivin基因启动子调控的stathmin基因siRNA真核表达载体;RT-PCR结果显示所构建的干涉载体可有效封闭stathmin基因表达;流式细胞仪分析结果显示,Hale细胞在stathmin-siRNA作用下G2/M期细胞的比例明显增加。结论: (1)成功构建了人stathmin基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer4.1-S1和pSilencer4.1-S2,并在HeLa细胞中有效的发挥了对stathmin基因表达的干涉作用。(2)survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体可有效地封闭HeLa细胞中stathmin基因表达,并使Hela细胞阻断于G2/M期,为以stathmin基因为靶点的恶性肿瘤生物治疗奠定了理论基础。