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随着动物年龄的增长,衰老细胞在各种组织中积累,分泌一系列炎症细胞因子、趋化因子、生长因子和蛋白酶,称为衰老相关的分泌表型（senescence associated secretory phenotype）,简称SASP。衰老细胞还发生了细胞周期阻滞,增殖潜力、衰老相关的?-半乳糖苷酶活性不可逆的丢失。许多SASP的组分会影响周围细胞和它们的微环境,SASP在细胞衰老、个体老化和衰老相关的疾病之间也许有作用。白藜芦醇,一种SIRT1的激活剂,具有抗衰老、抗炎症、抗氧化、抗自由基等多种药理学作用。贡氏假鳃鳉是一种生长在东非的硬骨鱼,具有寿命较短、繁殖速度快等优点,已经成为一种新兴的研究衰老的动物模型。我们实验室之前的研究显示白藜芦醇饲喂后显著延长了贡氏假鳃鳉的寿命[1,2]。以前的研究发现NF-?B是SASP的重要调节者,RelA/p65是NF-?B的亚基,I?B?是NF-?B的抑制蛋白,I?B?磷酸化后激活NF-κB。有研究表明,SIRT1通过去乙酰化RelA/p65的K310位点来抑制NF-κB的转录[3]。本实验利用一年生的贡氏假鳃鳉作为研究对象,总共144尾鱼,当鱼饲养至性成熟（4月龄）时,随机分成两组,对照组和处理组各72尾:实验组喂食添加白藜芦醇的食物（200?g/g食物）,对照组喂食不添加白藜芦醇的食物,待鱼长到6、9和12月龄时冰上处死取材。在此三个不同的年龄阶段,为了检测贡氏假鳃鳉肠道的老化情况,我们对SA-?-gal的活性进行了检测。为了探究老化对贡氏假鳃鳉肠道SASP的影响以及白藜芦醇对SASP抑制作用的具体机制,我们分别使用了ELISA、qPCR、免疫组化、免疫印记、免疫沉淀和免疫共沉淀等方法进行检测。实验结果显示:1.随贡氏假鳃鳉的衰老,肠道的?-半乳糖苷酶活性呈现上升的趋势,而白藜芦醇饲喂后降低了?-半乳糖苷酶的活性。2.为了探究老化以及白藜芦醇对贡氏假鳃鳉肠道SASP的影响,我们用qPCR、ELISA的方法检测了SASP相关分泌因子的变化,发现随鱼的衰老,肠道中促炎细胞因子IL-8和TNF?的水平逐渐增加,抗炎细胞因子IL-10的水平逐渐减少,而白藜芦醇饲喂后显著逆转了这些细胞因子变化。3.我们用qPCR和免疫组化的方法检测了贡氏假鳃鳉肠道中SIRT1的水平,发现随鱼的衰老,肠道中SIRT1的mRNA和蛋白表达水平都逐渐下降,而白藜芦醇饲喂后SIRT1的表达显著上升。4.我们用qPCR的方法检测了贡氏假鳃鳉肠道中NF-?B的表达,结果显示,随鱼的衰老,NF-?B的mRNA表达水平显著上升,而白藜芦醇饲喂后显著降低了NF-?B的表达。用9和12月龄的鱼进行免疫印迹实验,发现随鱼的衰老,RelA/p65和p-I?B?的蛋白水平显著增加,而白藜芦醇饲喂后显著减少了RelA/p65和p-I?B?的表达。我们提取9月龄鱼肠道的蛋白,沉淀等量的RelA/p65蛋白,用Ac-Lys抗体检测RelA/p65的乙酰化程度,发现白藜芦醇减少了RelA/p65的乙酰化水平。免疫印迹检测SIRT1的表达,发现白藜芦醇增加了SIRT1和RelA/p65复合物的形成,进而抑制了NF-?B的活性,最终抑制了SASP。5.用免疫组化的方法检测细胞增殖标志物PCNA和用免疫印迹的方法检测干细胞标志物LGR5,发现随鱼的衰老,肠道上皮细胞和肠道干细胞的数量都显著下降,而饲喂白藜芦醇后显著逆转了上述情况。总之,白藜芦醇激活SIRT1,通过减少p-I?B?和Ac-RelA/p65,进而抑制了NF-?B的活性,降低了SASP相关的促炎细胞因子IL-8和TNF?的水平,增加了抗炎细胞因子IL-10的水平,从而抑制了SASP。白藜芦醇也增加了肠道上皮细胞和肠道干细胞的增殖。最终白藜芦醇逆转了衰老相关的?-半乳糖苷酶活性随衰老进程呈现上升的趋势,延缓了肠道的衰老,延长了贡氏假鳃鳉寿命。