独一味苯丙氨酸解氨酶和查耳酮合成酶基因的克隆和表达研究

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本论文以玉树地区采集的独一味(Lamiophlomis rotata)为材料,将独一味的叶片作为主要研究材料,通过设计简并引物,先进行RT-PCR的逆转录扩增,然后运用RACE PCR技术,分别对独一味的PAL基因和CHS基因的cDNA全长序列进行扩增,再进行生物信息学分析,分析这两种基因的序列特征,同时,采用用Real-Time PCR的方法,用绿色荧光染料作为荧光基团,检测独一味不同组织中PAL基因和CHS的表达特性,试验的目的就是研究苯丙氨酸解氨酶和查尔酮合成酶这两种基因会在独一味各组织中会有怎样的调控作用,本论文所研究的主要结果如下:1、获得独一味PAL的全长cDNA,命名为LrPAL基因,克隆测得序列全长为2298bp,含有1个完整开放阅读框,简称为ORF,有2145bp左右,总共编码714个氨基酸;独一味CHS的全长cDNA,命名为LrCHS基因,全长2026bp,含有1个651bp的内含子,2个分别为178bp和998bp的外显子,LrCHS的ORF为1176bp,编码391个氨基酸。2、依据生物信息学软件的分析,LrPAL蛋白包含典型的PAL活性中心序列,这表明与其他植物的PAL蛋白有很高的同源性,LrPAL是典型的PAL家族成员;LrCHS的蛋白成分与其他植物相比,同源性更是高达79%-86%,而且还保留着大部分保守残基;进行的系统进化树分析表明,LrPAL蛋白和LrCHS蛋白,分别与唇形科植物的PAL蛋白和CHS蛋白聚为一类,说明独一味与唇形科具有很近的亲缘关系,符合常规植物分类。3、苯丙氨酸解氨酶基因在独一味的柄中表达量最高,茎中表达量最少,表达由强到弱次序的次序为:LrPAL柄>LrPAL叶>LrPAL花>LrPAL根>LrPAL茎;查尔酮合成酶基因在独一味不同组织中的表达由强到弱的次序为:LrCHS花>LrCHS叶>LrCHS柄>LrCHS根>LrCHS茎,独一味的不同组织中总类黄酮的含量和PAL基因、CHS基因表达量呈正相关关系。以上研究得到的结果对独一味这类中藏药以后的研究,尤其是抗逆性还有药学的研究奠定分子理论基础。
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