【摘 要】
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研究背景:缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤引起的急性肾功能衰竭在临床上非常多见,肾小管上皮细胞凋亡是其重要发生机制之一。基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue
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研究背景:缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤引起的急性肾功能衰竭在临床上非常多见,肾小管上皮细胞凋亡是其重要发生机制之一。基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMP-1)可抑制多种细胞凋亡,但确切机制尚不清楚。多数研究认为TIMP-1抑制内源性凋亡途径,但也有研究显示其抑制外源性凋亡途径,TIMP-1抗凋亡作用是否与其基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)抑制作用有关也存在争议。迄今为止,TIMP-1对各种原因包括肾脏I/R损伤所致的肾小管上皮细胞凋亡是否具有抑制作用尚未见报道。目的:采用人TIMP-1转基因小鼠建立肾脏I/R损伤模型,以野生型小鼠为对照,探讨TIMP1是否对肾脏I/R损伤所诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用。检测Caspase-3、8、9、Bc12、Bax等凋亡相关蛋白以及p-AKT、p-ERK、p-P38、p-JNK等PI3K/AKT通路和MAPK通路的关键蛋白,从而对TIMP-1抑制小鼠肾脏I/R损伤诱导肾小管上皮细胞凋亡的相关机制包括PI3K/AKT和MAPK通路在其中的作用进行探讨。分别采用MMPs抑制剂强力霉素和GM6001在体内和体外探讨TIMP-1对肾脏I/R损伤所致肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用是否与其MMPs抑制作用有关。方法:1.人TIMP-1转基因(TG)和野生型(WT)雄性小鼠随机分为假手术组和I/R模型组。双侧肾蒂夹闭30min再灌注24h制作肾脏I/R损伤模型。比色法测定caspase-3活性;过碘酸-希夫氏碱(PAS)染色观察肾脏组织病理改变;原位末端标记(TUNEL)法及DNA电泳观察肾小管上皮细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-3、8、9、T-ERK、p-ERK、p-P38、p-JNK、T-AKT、p-AKT、Bc12及Bax蛋白表达。2.野生型雄性小鼠随机分为单纯假手术组、单纯I/R模型组、强力霉素假手术组以及强力霉素I/R模型组,强力霉素组自建模前7天起至处死前,饮水
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