巴氏梭菌高产1,3-丙二醇的研究

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1,3-丙二醇(1,3-PD)是一个具有多种用途的中间化合物,是生产新型PTT纤维的主要单体,具有许多优良特性和很好的应用前景。微生物发酵法生产1,3-丙二醇与化学合成法相比具有显著的优点,因而越来越受到重视,成为当前的研究热点。本实验为提高巴氏梭菌转化甘油生产1,3-丙二醇的能力,采用以离子束与紫外线复合诱变和产物耐受相结合的平板筛选方法,同时测定了诱变前后甘油代谢途径中的甘油脱水酶(GDHt)和1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)的酶活变化,获得可耐受高浓度1,3-丙二醇的优良突变菌株2株,与出发菌株相比,两株高产突变菌株的1,3-丙二醇产量分别提高了43%和40%,达到66.84g/L和65.62g/L。并且对巴氏梭菌发酵甘油产生1,3-丙二醇的发酵条件做了研究,通过对pH、发酵时间、接种量、Mg、Fe和微量元素对巴氏梭菌发酵甘油产生1,3-丙二醇影响进行分析。结果说明,pH和菌体生长,1,3-丙二醇合成存在如下规律:pH高时,菌体生长较快,但1,3-丙二醇终浓度不高。pH较低时,刚好相反。发酵时间和接种量必须控制在24h和6%,这样才能保证巴氏梭菌发酵产生1,3-丙二醇的产量。Mg、Fe和微量元素也要适量添加,量不能过高,高浓度时1,3-丙二醇在发酵液中不是主要成分,影响1,3-丙二醇的产量,当浓度过低时会影响菌体的生长。最终确定的最佳发酵培养基是:甘油40.0 g/L,KH2PO4 0.5 g/L,K2HPO4 1.0 g/L,(NH42SO4 3.0 g/L,CaCO3 2.0 g/L,FeSO40.01 g/L,MgSO4·7H2O 0.2 g/L,酵母膏1.0 g/L,CaCl2·2H2O 0.02 g/L,微量元素2mL /L,pH6.5。
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