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目的：
构建pAdxsi-GFP-PSMA重组腺病毒，将其转染DC构建成DC疫苗，体外实验观察此DC疫苗呈递前列腺特异性膜抗原，观察其对前列腺癌的治疗效果，为下一步应用于体内实验奠定了基础。
方法：
一、PSMA腺病毒质粒的构建及鉴定
用Adxsi系统构建携带PSMA基因的复制缺陷型腺病毒载体pAdxsi-GFP-PSMA并大量制备。TCID50法测定病毒滴度，并用PCR法鉴定两种基因的表达。
二、健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞体外诱导及其体外感染腺病毒效率的测定
分离健康志愿者外周血PBMC，加入不同细胞因子体外诱导扩增培养DC，培养第5天时分成5组，分别按MOI为50、100、200、300、400加入Ad-GFP，于12，24，48h荧光倒置显微镜下观察同一MOI下绿色荧光蛋白(GFP)的表达;同时在转染48h后流式细胞仪(FCM)检测不同MOI下GFP阳性率，并用PE-7AAD凋亡和坏死试剂盒检测不同MOI下DC细胞的存活情况，摸索最适MOI。
三、树突状细胞感染PSMA基因重组腺病毒后的免疫功能变化
分离健康志愿者外周血PBMC，加入不同细胞因子体外诱导扩增培养DC、T，按最适MOI，在DC中加入相应的病毒量，分成三组:Ad-PSMA-DC组、Ad-GFP-DC组和普通未转染DC组，荧光倒置显微镜观察DC的形态学变化，培养48h后Western Blotting法鉴定PSMA基因在DC中的表达，直接免疫荧光法检测未感染DC与腺病毒感染后DC上CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达，ELISA试剂盒测定各组DC疫苗培养上清中IL-12分泌量的变化。CCK-8法检测不同转染组DC-CTL细胞及CTL细胞分别对三种前列腺癌细胞（LNCap、Du145、22RV）的杀伤活性。
结果：
一、经酶切电泳、测序、PCR法鉴定，证实重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-PSMA构建正确，插入片段包含PSMA，Ad-PSMA滴度为2×1010 pfu/mL。
二、同一MOI下转染48h后转染效率最高，另确定最佳MOI为200。
三、PSMA蛋白可以在DC上正常表达，腺病毒感染后不会影响DC的成熟及形态学改变，转染组DC表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR共刺激分子均上调，明显高于其它DC组;上清液中IL-12分泌水平共转染组(79.51±1.60) pg明显高于未转染组(P＜0.05)与Ad-GFP-DC组比较无统计学差异;效靶比为40∶1时肿瘤杀伤作用最强，在同一效靶比时PSMA-DC-T对LNCap的杀伤率明显高于对另两种前列腺癌细胞DU145、22RV的杀伤率(P＜0.05)，也明显高于其它DC-T组的杀伤率(P＜0.05）。
结论：
本实验中成功构建了Ad-GFP-PSMA病毒质粒，体外实验证实Ad-PSMA高效转染获得的成熟DC可高分泌IL-12，诱导CTL后能刺激和增强PSMA特异效应细胞对PSMA阳性表达前列腺癌细胞的杀伤作用。