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目的:本研究通过对大鼠任意皮瓣联合应用地塞米松(Dexamethasone)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF),观察其对任意皮瓣成活面积和组织学变化的影响,以证实其在防治任意皮瓣缺血坏死中的作用,为提高任意皮瓣移植的成活率,探索新的有效方法。并通过定量检测血清中的TNF-α及皮瓣中内皮细胞的细胞间粘附分子1(Intercellular Adhesion Molecule 1,ICAM-1)初步探讨其发挥作用的机制,为其临床应用提供可靠的实验依据。方法:1实验动物:健康Wistar大鼠(河北医科大学动物实验中心提供,体重280±10克)96只,雌雄不限。2动物分组:将大鼠随机分为四组,每组24只。A组为对照组:腹腔注射生理盐水0.2ml,皮瓣下滴注生理盐水0.25ml;B组为地塞米松组:腹腔注射地塞米松0.2ml(用量为5mg/kg),皮瓣下滴注生理盐水0.25ml;C组为bFGF组:腹腔注射生理盐水0.2ml,皮瓣下滴注含1750IU bFGF的生理盐水0.25ml(用量为155IU/cm2);D组为地塞米松联合bFGF组:腹腔注射地塞米松0.2ml,皮瓣下滴注含1750IU bFGF的生理盐水0.25ml。3模型制备:96只大鼠均以2 %戊巴比妥钠腹腔注射(35～40mg/kg)麻醉,麻醉满意后,背部脱毛,俯卧位固定,碘酒、酒精消毒。于鼠背正中以髂嵴连线为基准线,以后正中线为轴线,掀起一7.5cm×1.5cm大小的任意皮瓣(含脂膜肌层,长宽比5:1),其蒂在尾部。3-0丝线原位缝合皮瓣,B、D组术后即刻一次性腹腔注射地塞米松,C、D组术后即刻于皮瓣下均匀滴注bFGF。A组给予生理盐水腹腔注射及皮瓣下滴注,时间方法同上。4检测方法及观察指标:4.1皮瓣大体观察:术后第7d对大鼠背部随意皮瓣成活的情况进行肉眼观察。4.2皮瓣成活率:坏死皮瓣以其外观、颜色及质地来判断。术后7d,用数码相机进行皮瓣摄像,图象输入计算机,应用Image-Pro Plus.v6.0图象分析系统,计算出皮瓣成活率(即皮瓣成活面积与总面积之比)。4.3组织学检查:术后3 d和7 d各组均于皮瓣中段取0.5 cm×0.2 cm全厚皮瓣组织,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片、HE染色。4.3.1光镜下观察组织结构改变。4.3.2进行毛细血管计数。血管计数方法:所有血管均计数在内。每组5张切片,每张切片在中央区及周边区随机选取5个高倍视野,血管计数后求其平均数。4.3.3进行成纤维细胞计数。每组5张切片,每张切片在中央区及周边区随机选取5个高倍视野,成纤维细胞计数后求其平均数。4.4检测血清中TNF-α含量:各组分别于术后0h、1h、4h、8h、12h、24h心脏取血,离心后取血清,用双抗体夹心ELISA法测定TNF-α含量。4.5细胞间粘附分子1(ICAM-1)免疫组化染色切片:术后4h、8h、12h各组均于皮瓣中段取0.5 cm×0.2 cm全厚皮瓣组织,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,免疫组化染色,光镜观察ICAM-1的分布部位和表达。每张切片选取有代表性的区域,随机取5个互不重叠的400倍视野,以光密度200为背底,光镜显微照相机取图,应用Image-Pro Plus.v6.0图象分析系统进行定量分析,测量阳性目标累积光密度值(integrated optical density,IOD),并用计算机进行统计学处理。5统计学处理:整理各类数据并应用SPSS 14.0软件对数据进行处理。结果:1皮瓣大体观察:术后7d,各实验组皮瓣近段颜色淡红,弹性较好,并可见少量毛发生长;中段:中间区颜色由近向远淡红色逐渐变暗,表面无痂壳形成,无毛发生长,边缘区颜色发黑并有少量痂壳覆盖,弹性减退;远段:颜色发黑,表面有痂壳,弹性差。原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃,出血量较多;肉膜下无积血,少量渗出,血管丰富。且联合用药组皮瓣颜色及弹性均略好于两种药物单独使用组。生理盐水对照组的皮瓣近段颜色淡红,由近向远颜色变暗,皮瓣蒂部可见少量毛发生长;中段及远段:颜色发黑,表面有痂壳形成,弹性极差,原位掀起皮瓣时见皮瓣出血较少,肉膜下炎性分泌物较多,血管相对稀疏。根据观察结果,B、C、D组皮瓣中远段成活情况均明显好于A组;D组皮瓣中远段成活情况略好于B、C组。2皮瓣成活率:地塞米松+bFGF组(58.2±5.2)%﹥bFGF组(50.5±3.9)%﹥地塞米松组(48.7±4.2)%﹥对照组(39.5±3.7)%,四组有非常显著性差异(F=32.08,P﹤0.01)。两两比较,地塞米松组与bFGF组间无显著性差异(P﹥0.05),其他各组间均有显著性差异(P﹤0.01)。3组织学检查:3.1术后3d,皮下组织水肿,血管扩张、充血,炎症反应轻,未见坏死征象。术后7d,各实验组:表皮萎缩不明显或局部破损,皮肤各层结构无明显改变,嗜中性粒细胞浸润,真皮和真皮下层可见新生小血管,皮下纤维组织增生,纤维排列较规则。对照组:表皮及真皮完全坏死,结构混乱不清,大量嗜中性粒细胞浸润,肌纤维坏死明显。3.2毛细血管记数:术后3d,每高倍视野平均含毛细血管数为:地塞米松+bFGF组(7.4±0.55)个﹥bFGF组(6.8±1.09)个﹥地塞米松组(4.6±0.55)个﹥对照组(3.2±0.84)个,四组有非常显著性差异(F=32.40,P﹤0.01)。两两比较,地塞米松+bFGF组与bFGF组间无显著性差异(P﹥0.05),其他各组间均有显著性差异(P﹤0.01)。术后7d,地塞米松+bFGF组(7.0±0.71)个﹥bFGF组(3.8±1.09)个﹥地塞米松组(2.6±0.55)个﹥对照组(0.4±0.55)个,四组有非常显著性差异(F=65.94,P﹤0.01)。两两比较各组间均有显著性差异(P﹤0.05)。3.3成纤维细胞记数:术后3d,每高倍视野平均含成纤维细胞数为:地塞米松+bFGF组(27.8±3.56)个﹥bFGF组(26.4±3.21)个﹥地塞米松组(11.8±2.86)个﹥对照组(11.2±2.39)个,四组有非常显著性差异(F=44.18,P﹤0.01)。两两比较,地塞米松+bFGF组和bFGF组成纤维细胞数量明显多于地塞米松组和对照组,差异显著(P﹤0.01);地塞米松+bFGF组、bFGF组间比较,地塞米松组、对照组间比较,均无显著性差异(P﹥0.05)。术后7d,地塞米松+bFGF组(48.2±7.33)个﹥bFGF组(23.6±4.45)个﹥地塞米松组(15.0±1.87)个﹥对照组(0.6±0.89)个,四组有非常显著性差异(F=102.47,P﹤0.01)。且两两比较各组间有显著性差异(P﹤0.01)。4血清中TNF-α含量:对照组及bFGF组,于术后4h TNF-α的浓度达到高峰,然后逐渐下降,于术后24h下降明显;地塞米松及地塞米松+bFGF组,于术后8h TNF-α的浓度达到高峰,其峰值明显低于对照组和bFGF组(P﹤0.01),亦于术后24h下降明显。5 ICAM-1免疫组化染色结果:各组于术后4h皮瓣组织的上皮细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞的胞浆中均呈现ICAM-1的mRNA表达。并均于术后8h呈现ICAM-1阳性蛋白表达高峰,四组峰值有非常显著性差异(F=224.30,P﹤0.01),两两比较,对照组和bFGF组明显高于地塞米松组和地塞米松+bFGF组(P﹤0.01)。之后缓慢下降,术后12h仍保持较高水平。结论:地塞米松和bFGF均能改善皮瓣血液循环,减轻炎症反应,刺激肉芽组织生长,防治皮瓣缺血坏死,促进皮瓣成活;且地塞米松+bFGF促进皮瓣成活优于单用地塞米松和单用bFGF。