游离钙信号通路介导二烯丙基三硫诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡

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目的:研究二烯丙基三硫(diallyl trisulfide, DATS)抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导其凋亡的作用及游离钙(free calcium, Ca2+)、活性氧(reactive oxygen species, ROS)、Caspase-3的变化与DATS诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的关系。 方法:采用倒置显微镜、光镜、MTT法、流式细胞术及Western blot等方法,观察DATS对体外培养的MGC-803细胞生长抑制作用,细胞周期分布和凋亡的影响以及细胞内Ca2+、ROS、Caspase-3的变化。 结果:MTT显示,4、8、12、16、24mg·L-1DATS处理人胃癌MGC-803细胞72h,细胞生长抑制率分别为0.231±0.037,0.305±0.036,0.455±0.029,0.607±0.058,0.751±0.019,表明DATS呈浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);光镜下,DATS作用的胃癌细胞出现体积缩小,胞浆强嗜酸性,核固缩浓染的凋亡典型形态学改变;流式细胞术结果显示,4、8、12、16mg·L-1的DATS处理细胞24h后,凋亡率分别为3.8%、10.6%、23.0%、24.2%,除4 mg·L-1组外,其余各组均明显高于对照组,表明DATS呈浓度依赖性诱导MGC-803细胞凋亡(P<0.01)。4、8、12、16 mg·L-1DATS处理细胞24h后,G1期细胞数上升,S期细胞减少,提示DATS可阻滞MGC-803细胞于G1期。细胞内钙离子鳌合剂BAPTA-AM 10μmol·L-1、抗氧化剂NAC 10mmol·L-1、Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO 20 μmol·L-1预处理细胞1h,再加12mg·L-1的DATS处理24h后,凋亡率分别为13.2%、10.5%、5.1%,比单用12mg·L-1的DATS组显著下降,提示三者具有抑制DATS诱导凋亡的作用(P<0.01)。4、8、12、16mg·L-1DATS处理MGC-803细胞4h,Fluo3荧光强度分别为4.0±0.5、8.8±0.3、15.4±0.4、16.0±0.5,
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