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第一部分白杨素抑制胰腺癌细胞增殖并诱导其线粒体途径凋亡目的研究黄酮类化合物白杨素对人胰腺癌细胞增殖、凋亡等的影响及其可能的机制。方法细胞增殖活性采用CCK-8法和克隆平板试验检测：细胞凋亡采用Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术检测；细胞周期采用PI单标流式细胞术检测；免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达。结果白杨素能抑制胰腺癌细胞增殖和克隆形成,且这种作用呈时间和浓度依赖性；白杨素能阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导胰腺癌细胞发生凋亡；免疫印迹结果显示,白杨素能引起PARP、Caspase-9、Caspase-3剪切体的激活,同时上调Bax/Bcl-2的比值。结论白杨素能抑制人胰腺癌细胞增殖和克隆形成能力,并阻滞细胞周期于G0/G1期；白杨素能够诱导胰腺癌细胞发生线粒体途径凋亡。第二部分白杨素通过抑制溶酶体酶活性阻断胰腺癌细胞自噬目的研究白杨素对人胰腺癌细胞自噬的影响及其可能的机制。方法构建携带GFP标签的LC3过表达慢病毒载体并稳定转染胰腺癌细胞株,激光共聚焦显微镜观察细胞内GFP-LC3点状聚集的数目：免疫印迹法检测自噬相关蛋白的表达情况：免疫荧光法检测自噬底物p62蛋白的表达;采用透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化；构建携带GFP和mRPF双标签的LC3过表达慢病毒载体并稳定转染胰腺癌细胞株,激光共聚焦显微镜观察细胞内GFP-LC3和mRFP-LC3共定位关系;利用溶酶体探针LysoTracker Red检测溶酶体与GFP-LC3之间的空间定位关系；采用AO(吖啶橙)染色观察细胞内酸性自噬泡的数目；采用组织蛋白酶活性测定试剂盒检测细胞内组织蛋白酶的活性情况。结果共聚焦结果显示,白杨素能导致稳定转染GFP-LC3过表达慢病毒的胰腺癌细胞内出现大量GFP-LC3点状聚集,且这种作用呈浓度和时间依赖性;同时,这种GFP-LC3绿色荧光与LysoTracker Red红色荧光具有共定位关系：免疫印迹和免疫荧光结果显示,白杨素可诱导胰腺癌细胞自噬关键蛋白LC3-II的表达增加,而自噬底物蛋白p62表达也增加；电镜结果显示,白杨素能诱导胰腺癌细胞胞质内形成大量自噬泡；免疫印迹结果显示,溶酶体抑制剂CQ与白杨素联合作用后,LC3-II的表达较单用CQ组无明显增加；与CQ作用相似,白杨素能诱导稳定转染GFP-mRPF-LC3过表达慢病毒的胰腺癌细胞内GFP-LC3和mRFP-LC3荧光共定位,而自噬激活剂Rap作用后mRFP-LC3荧光显著高于GFP-LC3;AO染色结果显示,白杨素与CQ均能显著增加胰腺癌细胞内酸性自噬泡的数量；组织蛋白酶活性检测和免疫印迹结果显示,白杨素能抑制胰腺癌细胞内组织蛋白酶B和组织蛋白酶D的活性。结论白杨素通过抑制溶酶体酶活性阻断胰腺癌细胞自噬。第三部分白杨素通过抑制自噬增强胰腺癌细胞对吉西他滨化疗敏感性目的探讨白杨素联合吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法细胞增殖活性采用CCK-8法检测；细胞凋亡采用Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术检测;倒置显微镜观察药物单用或联用对细胞形态的影响；免疫印迹法检测自噬和凋亡相关蛋白的表达;采用RNAi技术沉默自噬关键基因Beclin1、ATG5、ATG7后检测吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、凋亡作用的变化。结果吉西他滨能通过浓度和时间依赖性方式部分抑制胰腺癌细胞增殖;免疫印迹结果显示,吉西他滨可诱导胰腺癌细胞LC3-Ⅱ的表达增加,而自噬底物蛋白p62则表达减少；吉西他滨与溶酶体抑制剂CQ合用后,LC3-Ⅱ的表达较单用CQ显著增加；无论是联合自噬抑制剂CQ或是沉默自噬关键基因Beclin1、ATG5、ATG7后,均能显著增加吉西他滨对胰腺癌细胞的杀伤效果；当吉西他滨与白杨素联合使用后,LC3-Ⅱ的表达较二者单用显著增加；同时,两药联用较单药使用更能抑制胰腺癌细胞活性并诱导细胞凋亡,而在联用基础上加入CQ后并未增加细胞杀伤效果；免疫印迹结果显示,两药联用较单药使用更能增加PARP、Caspase-9、Caspase-3剪切体的激活,并进一步上调Bax/Bcl-2的比值。结论吉西他滨部分抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞发生保护性自噬：白杨素通过抑制自噬增强胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性。