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海马资源在我国相对较为充分,其中,海南的海马资源丰富,随着国内外海马养殖技术的逐步发展,我国部分地区已有规模化、工厂化的海马养殖基地,可提供数量可观的海马。海马活性成分丰富,药理作用多种多样,例如具有温肾壮阳、抗氧化、抗疲劳、延缓衰老、抗肿瘤等功效,是我国珍贵的传统药物,具有研究价值。本实验以三斑海马为研究对象,通过蛋白酶酶解法制备分别具有ACE(血管紧张素转换酶)抑制活性和抗氧化活性的酶解产物,结合现代分离纯化手段,获得ACE抑制多肽和抗氧化多肽,为进一步海马活性研究提供依据及参考,以期提高海马的利用价值。本文通过三斑海马酶解液的制备、ACE抑制活性肽的分离和体外消化模型的建立研究了三斑海马蛋白肽的ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶制备得到具有ACE抑制活性的三斑海马酶解液,经葡聚糖凝胶层析分离纯化后,得到具有较高ACE抑制活性的组分(其ICso为0.91mg/mL);通过对该组分的氨基酸组成和体外消化模型分析,发现该组分中疏水性氨基酸的含量为50.48%,消化酶作用后,显著提高ACE抑制活性,经判断,该组分中的蛋白肽为前体型抑制剂。本文研究了三斑海马的抗氧化活性,通过酶解法制备活性肽,利用Sephadex G-25凝胶层析、阴离子交换树脂层析、HPLC三种分离技术,以DPPH自由基清除率为指标,评价酶解液及分离组分的抗氧化活性。结果表明,三斑海马木瓜蛋白酶酶解产物的抗氧化活性最高,浓度为300μg protein/mL时,其DPPH自由基清除率为23.10%；对木瓜蛋白酶酶解液进行Sephadex G-25凝胶层析,分离出3个组分,测定各组分的DPPH自由基清除率,组分C的DPPH自由基清除率显著高于A和B,浓度为lmgprotein/mL时,其DPPH自由基清除率为78.00%;对组分C进行阴离子交换树脂层析,得到5个组分峰,测定各分离组分浓度为200μg protein/mL时的DPPH自由基清除率,除C5组分,其他组分的DPPH自由基清除能力较低,C5的清除率显著高于其他4个组分,为70.89%；组分C5经SPE C18小柱及PD-10脱盐柱脱盐后,得到脱盐组分DS。组分DS经HPLC分离后,得到3个主峰,测定各分离组分浓度为50μgprotein/mL时的DPPH自由基清除率,其中DS3的活性最高,DPPH自由基清除率为36.0%,其IC50为58.52μg protein/mL。