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近年来,乳腺癌的发病率逐渐上升,严重影响女性的生活质量。研究表明,雌激素受体(estrogen receptors, ERs)在乳腺癌的发生发展过程中发挥重要作用。ERa是一种类固醇核受体,具有促进肿瘤细胞生长和存活的作用,已成为激素依赖的乳腺癌治疗的重要靶点之一。因此,鉴定对ERa功能具有调控作用的分子可以促进乳腺癌治疗策略的发展。FOXK2是一种叉头(forkhead box, FOX)蛋白转录因子。有研究表明,FOX家族的FOXA1和FOXO3a可以通过其保守的DNA结合结构域(FKH domain)和ERa相互作用,并调控其功能,而FOXK2也具有FKH结构域。因此,FOXK2蛋白对ERa的功能可能也具有调控作用。本研究从FOXK2与ERa的相互作用入手,探讨了FOXK2对ERa介导的基因转录的调控机理。本论文的主要工作如下：1.通过免疫组织化学实验和免疫印迹实验研究了FOXK2和ERα在乳腺癌中的相关性,发现FOXK2和ERa的蛋白水平在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中存在负相关。再使用FOXK2的全长和各缺失体,通过免疫共沉淀、哺乳动物细胞双杂和免疫荧光等实验,研究了FOXK2和ERa之间的相互作用。结果表明FOXK2通过其FKH结构域和ERa相互作用,这种相互作用发生在细胞核内。2.由于FOXK2ERα在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中的蛋白水平呈负相关,接下来通过免疫印迹实验检测了FOXK2对ERα蛋白水平的影响。结果表明FOXK2能够缩短ERa的半衰期,并以剂量依赖的方式下调ERa的蛋白水平,但不影响其mRNA水平。进一步的研究发现FOXK2是通过促进ERa的泛素化降解降低其蛋白水平的。3. BARD1是ERa泛素E3连接酶BRCA1/BARD1的一个亚基,通过免疫共沉淀实验发现,过表达FOXK2能够增强ERα与BRCA1/BARD1之间相互作用,而沉默FOXK2的表达能够减弱掉ERa与BRCA1/BARD1之间相互作用,表明FOXK2可以作为一个桥梁蛋白促进ERa与BRCA1/BARD1的结合,进而增强ERa的泛素化,导致其降解。4.进一步通过报告基因和Real-time PCR等实验,研究了FOXK2对ERa的转录活性及其靶基因mRNA水平的影响。实验结果表明FOXK2能够抑制ERa的转录活性,并下调ERa下游靶基因如Cyclin D1和GREB1的mRNA水平。5.最后,通过细胞集落形成、MTT以及流式细胞仪等实验检测了FOXK2对乳腺癌细胞功能的影响,发现FOXK2能够抑制ERα依赖的细胞增殖能力。本研究首次将FOXK2与ERα联系起来,确定FOXK2是ERa的一个有效的负调控因子,能通过ERa抑制乳腺癌细胞的增殖,有助于阐述ERa介导的乳腺癌发生发展的分子机理,为乳腺癌的治疗提供理论依据,为ERα介导的疾病的治疗开辟了新思路。