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背景肺癌是世界范围内死亡中最常见的恶性肿瘤,发病率高死亡率高,严重的威胁着人们的身体健康,但目前肺癌的发生机制尚未明了。MicroRNA21(miR-21、微小RNA21)是非编码的小分子RNA,参与基因转录后水平的调控,参与多种肿瘤发生。Caspases-3是半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶,能特异性地切割靶蛋白天冬氨酸残基后的肽键,从而引起细胞的凋亡,它也是miR-21的靶基因。MiR-21/Caspases-3的通路调控异常在肺癌的发生发展中的意义,目前尚未见报道。本课题通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)等方法,检测大鼠肺鳞癌阻止中IniR-21、Caspases-3的表达情况,探讨miR-21/Caspases-3通路异常表达对肺鳞癌发生发展的影响,为防治肺癌提供基因治疗的新思路。目的通过检测miR-21和Caspases-3在大鼠肺鳞癌发生过程中的动态表达水平,探讨miR-21与Caspaces-3在肺鳞癌发生过程中的作用和意义。方法1.建立大鼠肺鳞癌模型：实验组(60只)于左肺下叶支气管灌注含有三甲基胆蒽(MCA)和二乙基亚硝胺(DEN)的碘油溶液0.1ml;对照组(8只)于左肺下叶支气管灌注0.1ml碘油。获取肺鳞癌形成过程中各阶段的标本,HE染色,显微镜下诊断分型；2. Real time PCR(qRT-PCR)检测各个阶段病变组织中miR-21的表达水平；3. RT-PCR检测各个阶段病变组织中Caspases-3mRNA的转录水平：免疫组化检测各个阶段病变组织中Caspases-3的蛋白表达水平；5.采用SPSS17.0软件包对实验结果进行统计学分析。结果1.动物模型实验组中48只Wistar大鼠发生癌变,诱癌率为80%(48/60),癌变的标本有多个阶段病变共存,一共获取支气管粘膜上皮增生组织21例,不典型增生13例,原位癌28例,侵袭癌20例,转移癌16例。对照组8只Wistar大鼠未见肿瘤发生。2.MiR-21的表达qRT-PCR检测miR-21的表达结果如下：对照组0.0017±0.0006;不典型增生组0.0178±0.0055;浸润癌组0.0589±0.0036；转移癌组0.1327±0.1340,组间方差分析F=17.016,P<0.05,对照组和实验组之间存在差异性(P<0.05),实验各组组内之间存在差异性(P<0.05)。3. Caspases-3蛋白与基因表达根据免疫组化评分标准Caspases-3蛋白在不同发病阶段的表达评分结果如下：对照组为4.50±0.93；不典型增生组为2.80±1.26；癌组为2.00±1.43；转移癌组为1.00±0.78。对照组和实验组中的差异具有统计学意义(P<0.01),不典型增生组、癌组、转移癌组组内之间差异也具有显著性(P<0.01),在鳞癌组中Caspases-3蛋白的表达水平均低于不典型增生组和对照组(P<0.01)。 Caspases-3mRNA检测表达含量结果如下：对照组为1.1217±0.0165；不典型增生组为1.0350±0.0320；浸润癌组为0.7006±0.0209；转移癌组为0.4891±0.0133。实验组与对照组相比具有显著性差异(P<0.01),不典型增生组、癌组、转移癌组组内之间基因表达的差异也具有显著性(P<0.01,),在癌组中Caspases-3mRNA的表达均低于不典型增生组和对照组(P<0.01)。 Caspases-3蛋白和基因的表达具有较好的一致性(.Kappa=0.608,p<0.01);4.MiR-21和Caspases-3之间的相关性经统计学分析在肺鳞癌组中,miR-21和Caspases-3蛋白二者之间呈负相关性(r=-0.910,<0.01)；miR-21和Caspases-3mRNA二者之间也呈负相关性(r=-0.953,<0.01)。结论1.MiR-21在肺癌中呈高表达,且Caspases-3的表达降低,可能与肺癌的发生过程中细胞凋亡减少密切相关。2.联合检测miR-21和Caspases-3有利于肺癌的早期诊断,为肺癌的预后评估及治疗靶点的选择奠定了基础。