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蛹虫草(Cordyceps militaris)与冬虫夏草同属异种,是虫草属的模式种,广泛分布于世界各地,是一种珍贵的食药兼用的真菌。蛹虫草具有广泛的生理活性和独特的药用价值,多糖作为蛹虫草中最重要的活性成分之一,已经成为各界学者研究的焦点。目前,国内外已经对多糖做了大量研究,但是利用亚临界水萃取蛹虫草多糖的研究鲜见报道。鉴于此,本文旨在利用亚临界水萃取技术从蛹虫草菌丝体中分离蛹虫草多糖,研究多糖的萃取工艺和分离纯化技术,并初步研究蛹虫草多糖的结构、溶液构象和免疫活性,以期为新型多糖药物的开发提供理论依据。得到的主要结论如下:(1)在单因素试验的基础上,采用响应面试验设计法,对亚临界水萃取蛹虫草多糖的工艺进行优化,得出最优萃取工艺参数为:亚临界水p H为8,萃取温度为180℃,萃取水料比为21:1(m L/g),萃取时间为13 min。在上述参数下,多糖的理论萃取得率为7.71%,实际萃取得率为7.13%。与常规热水萃取法相比,亚临界水萃取法在萃取时间、萃取得率方面占有较大优势,与常规热水萃取法相比,萃取得率提高5.41个百分点。(2)在浓度为0.6-1.5 mg/m L范围内,亚临界水和传统热水浸提方法得到的粗多糖还原能力均随浓度的增大而增强;在0.2-1.0 mg/m L范围内,二者均具有良好的DPPH自由基清除能力,其清除能力随浓度的升高而增强,且亚临界水萃取的多糖清除能力略高于热水萃取的多糖,其IC50值分别为0.314和0.324 mg/m L。(3)亚临界水萃取的蛹虫草粗多糖经DEAE-52柱层析和Sephadex G-100柱层析逐步分离纯化后得到两种均一多糖CMP-W1和CMP-S1,分别为白色絮状固体和淡黄色絮状固体,多糖含量分别为92.72%和89.24%。(4)蛹虫草多糖CMP-W1重均分子量Mw为366.2 k Da;由D-甘露糖、D-葡萄糖及D-半乳糖组成,其摩尔比分别为2.84:1:1.29;主链部分以甘露糖为主,支链部分以半乳糖为主;刚果红分析得出,CMP-W1存在三螺旋结构,在中性水中的有效半径为992 nm,分散度为0.304,原子力显微镜观察得到CMP-W1是由大量的单分子链通过多糖分子间或分子内作用相互缠绕在一起形成的聚集体。(5)CMP-S1重均分子量Mw为460.3 k Da;由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成,其摩尔比为2.05:1:1.09;甘露糖和葡萄糖是其主链的主要组成部分,半乳糖是其支链的主要组成部分。红外光谱结果显示CMP-S1是一种β构型的吡喃聚糖,刚果红分析得出,CMP-S1不存在三螺旋结构;在中性水中的有效半径分别为713.9 nm,分散度为0.257,原子力显微镜观察得到CMP-S1均由大量的单分子链通过多糖分子间或分子内作用相互缠绕在一起形成的聚集体。(6)体外实验研究表明,CMP-W1和CMP-S1均能显著促进小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,通过对淋巴细胞免疫因子IL-10和INF-γ的研究表明,CMP-W1和CMP-S1均可显著促进小鼠脾淋巴细胞分泌Thl/Th2型细胞因子,增强小鼠的免疫功能。