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高血脂症属于体内血脂代谢异常所致的疾病,血脂水平过高会诱发动脉粥样硬化、心肌梗死、冠心病等心脑血管疾病,该类疾病已严重威胁人类健康。因此,具有降血脂功效的肽的筛选和降血脂药物开发的相关研究备受学术界关注。本研究以蚕蛹蛋白为原料,建立了蚕蛹蛋白降血脂肽体外活性的检测方法,优化了蚕蛹蛋白降血脂肽的酶解条件,对所得的蚕蛹蛋白降血脂肽进行分离纯化,建立构效关系的药效团模型,并在此基础上进行了蚕蛹蛋白降血脂肽的一级结构鉴定。试验结果如下：1、通过检测反应体系中NADPH的浓度变化,建立了测定HMG-CoA还原酶抑制剂活性的HPLC法。以Symmetry(?) C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250mm)进行分离,流动相为：V (K2HPO4-KH2PO4):V(甲醇)=85：15,pH 7.2,流速1mL/min;检测波长337nm：进样量20p,L；柱温25℃。此条件下,NADPH线性范围为0.6～600μmol/L，加标回收率为94.48%-101.81%,相对标准偏差(n=5)小于4.49%,最低检出限为0.1μmol/L。2、基于响应面法优化对中性蛋白酶降解蚕蛹蛋白制备降血脂肽的酶解条件进行了优化。得到制备蚕蛹蛋白降血脂肽的最佳酶解条件为：酶量5.1%(w/w),酶解时间5h,酶解温度52℃,酶解pH=7.0,底/水比(w/v)=3.9%。在此条件下,蚕蛹蛋白降血脂肽对3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)的抑制率为45.24%。建立了基于蚕蛹蛋白降血脂肽酶解条件的优化模型。验证实验结果表明该模型的预测准确率达97.31%。3、通过对分子量小于5000Da和3000Da的肽段用G-15进行凝胶柱层析分离,然后对其各个峰的HMGR抑制活性进行比较,发现分子量小于3000Da的肽段分离得到的四号峰具有最好的抑制活性。对该峰进行二次分离,得到5号峰,其抑制活性为32.92%。并将此峰作为蚕蛹蛋白降血脂肽一级结构鉴定的目标峰。同时,以20个已经公布了结构和活性数据的HMGR抑制肽为训练集,利用MOE分子软件生成了HMGR抑制肽的药效团模型DDAN,即2个氢键给体,1个氢键受体,1个羧基给体。4、将5号峰进行氨基酸组分测定,得到此蚕蛹蛋白主要含有16种氨基酸成分。其中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、组氨酸(His)含量最高,所占百分比分别为20.07%、16.00%、9.66%。通过对5号峰的分子量的测定,得到其分子量范围为125-503Da。根据氨基酸组分测定结果和分子量范围,判断蚕蛹蛋白降血脂肽应以三肽为主,其肽序可能为DEH、DHE、HDE。对这三种肽进行化学合成,其分子量为400Da,纯度都大于98%,HMGR抑制活性IC50值分别为0.18mg/mL、0.06 mg/mL和0.004 mg/mL。