亲和胶质气体泡沫的性质及其吸附分离蛋白质的研究

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自胶质气体泡沫(CGA)技术问世以来,它在蛋白质等生物大分子分离过程中的应用一直收到广泛地关注,用这种新型的技术分离蛋白质取得了较高的分离效果。本研究展开了以下的研究工作:首先,本文研究了CGA的制备方法,并分别考察了表面活性剂种类、浓度、制备温度、搅拌时间、搅拌速度、pH值、无机盐浓度、溶液粘度等因素对于CGA性能的影响。研究结果表明,影响CGA半衰期的最主要因素是表面活性剂的浓度,在AOT和Triton X-100两种表面活性剂溶液中,CGA半衰期均随着表面活性剂浓度的增加而升高,当AOT和Triton X-100浓度分别达到1.0mg·ml-1和0.05ml·ml-1后,CGA半衰期的变化不再显著。CGA半衰期还随着搅拌速度的升高而增加直到搅拌速率超过10000r·min-1,而后由于搅拌的剪切作用对CGA的影响半衰期有所降低。此外,无机盐加入将严重破坏离子型表面活性剂制备的CGA的稳定性,而对于非离子型则无明显影响;pH值和粘度对CGA的性质基本无影响。在常规CGA性能研究的基础上,本文在CGA体系中引入亲和配基以提高CGA的选择性。作者将非离子型表面活性剂Triton X-114的上修饰胰蛋白酶抑制剂对氨基苯甲脒(PAB)合成了亲和表面活性剂(PAB-TX),并以此亲和表面活性剂制备亲和CGA。在此基础上,本文深入研究了亲和CGA体系的基本性质,并与常规CGA体系进行了比较。研究结果表明,与Triton X-114相比,亲和表面活性剂PAB-TX的浊点并未发生明显改变,但其溶解性有所提高。用PAB-TX制备的亲和CGA性能与普通CGA相比稳定性更高。本文将PAB-TX和Triton X-114制备的CGA应用于蛋白质的分离纯化过程中,研究了胰蛋白酶在上述两种CGA体系中的吸附性能,及影响胰蛋白酶分离的主要因素。研究结果表明,亲和CGA体系对吸附胰蛋白酶的效果明显优于普通CGA体系。在胰蛋白酶与溶菌酶混合体系中,亲和CGA对胰蛋白酶的回收率高出溶菌酶近3倍,分离因子和纯化因子分别达到1.8和2.5。这说明亲和CGA对胰蛋白酶具有更高选择性。
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