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目的:观察RNA干扰沉默Nampt蛋白对体外培养的SKOV3人卵巢癌细胞生长的影响,并探讨其作用机制。 方法:(1)Nampt蛋白的shRNA质粒的构建。(2)Nampt蛋白特异性shRNA表达载体 shRNA-Nampt经LipofectamineTM2000介导转染人卵巢癌SKOV3细胞。(3)噻唑蓝(MTT)法检测shRNA-Nampt卵巢癌SKOV3细胞生存率的影响。(4)流式细胞仪检测Nampt低表达对SKOV3细胞增殖的影响。(5)QRT-PCR和Western-blotting检测低表达Nampt蛋白对人卵巢癌SKOV3细胞NAD、SIRT1、P53蛋白分子表达的影响。 结果:(1)成功构建Nampt蛋白的shRNA质粒并鉴定。(2)Nampt蛋白特异性shRNA表达载体shRNA-Nampt经LipofectamineTM2000介导转染人卵巢癌SKOV3细胞后Nampt蛋白表达降低。(3)MTT结果显示shRNA-Nampt组人卵巢癌SKOV3细胞生存率明显较无序对照组和正常组降低。(4)流式结果显示Nampt低表达显著抑制SKOV3细胞的增殖。(5)QRT-PCR及Western-blotting检测发现shRNA-Nampt组人卵巢癌SKOV3细胞的NAD、SIRT1蛋白分子表达水平降低,P53蛋白分子表达水平增高。 结论:shRNA沉默Nampt可以有效抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,其机制可能是影响了NAD、SRIT1、P53蛋白表达。