【摘 要】
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目的:检测miR-16-5p在原发性肝癌(以下简称“肝癌”)组织样本及细胞中的表达,探索其对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,并研究相关分子机制。方法:1.通过qRT-PCR检测肝癌
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目的:检测miR-16-5p在原发性肝癌(以下简称“肝癌”)组织样本及细胞中的表达,探索其对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,并研究相关分子机制。方法:1.通过qRT-PCR检测肝癌组织标本及配对的癌旁组织标本;正常肝细胞及肝癌细胞中miR-16-5p的表达情况。2.采用RTCA系统、Tranwwell小室侵袭实验和细胞划痕实验来检测过表达miR-16-5p后对HepG2人肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。3.使用生物信息学在线数据库预测miR-16-5p下游靶基因并用双荧光素酶报告基因及Western bolt等技术进行验证。4.WB检测过表达miR-16-5p对EMT相关蛋白表达的影响。5.细胞实验检测共同转染VEGFA对miR-16-5p功能的影响。结果:1.与癌旁组织相比,miR-16-5p在肝癌组织中的表达明显降低,差异存在统计学意义(P<0.01);在HepG2、HuH-7人肝癌细胞株中的表达较HL-7702人正常肝细胞株明显降低,差异存在统计学意义(P<0.001);2.上调miR-16-5p的表达后,HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的能力均显著减弱,差异存在统计学意义(P<0.001,P<0.01,P<0.01);3.在线数据库预测VEGFA的3’-UTR含有miR-16-5p的结合位点,VEGFA可能是miR-16-5p的靶基因;4.VEGFA野生型与miR mimics共转染后细胞中荧光素酶活性较对照组明显降低,差异存在统计学意义(P<0.05);5.上调miR-16-5p表达后,VEGFA、N-cadherin及Vimentin的蛋白表达量均明显下降(P<0.001);E-cadherin蛋白表达量上升(P<0.05)。6.转染pcDNA3.1-VEGFA后,miR-16-5p抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的作用明显下降,差异存在统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。结论:1.miR-16-5p在肝癌组织及细胞中表达下降;2.上调miR-16-5p可导致VEGFA蛋白表达下降,且生信学预测与双荧光素酶报告结果均表明VEGFA是miR-16-5p的下游靶基因。3.miR-16-5p可抑制HepG2肝癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT过程,在肝癌细胞中起到抑癌因子的作用,这一作用与miR-16-5p/VEGFA通路有关。
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