LncRNA NBAT1对膀胱癌5637细胞生物学行为的影响及其慢病毒载体的构建

来源 :兰州大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:yalaso_wind
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目的:检测长链非编码RNA成神经细胞瘤相关转录本1(neuroblastoma associated transcript 1,NBAT1)在人膀胱癌细胞株中的表达情况,并探讨NBAT1基因表达下调对膀胱癌5637细胞生物学行为的影响。通过构建shRNA慢病毒载体进一步研究NBAT1基因在膀胱癌细胞中具体功能及相关机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测7种膀胱癌细胞株(RT4、5637、EJ、J82、TCC-SUP、T24和UM-UC-3)中NBAT1 mRNA的表达水平,分析其与膀胱癌细胞恶性程度的关系。将靶向NBAT1基因的特异性siRNA转染膀胱癌5637细胞,实时荧光定量PCR法检测NBAT1基因的表达变化。然后,分别采用CCK-8法、细胞划痕愈合实验、Hoechst染色法以及Transwell迁移和侵袭实验检测并分析NBAT1基因表达下调对膀胱癌5637细胞增殖活力、迁移、侵袭及顺铂诱导后细胞凋亡的影响。构建NBAT1基因和阴性对照慢病毒shRNA载体,将其包装成病毒颗粒,进而感染目的细胞。结果:NBAT1在恶性程度较低的膀胱移行细胞乳头瘤细胞RT4中的表达水平明显高于恶性程度较高的膀胱移行上皮癌细胞5637、EJ、J82、TCC-SUP、T24和UM-UC-3(P值均<0.01)。特异性siRNA转染膀胱癌5637细胞后,NBAT1基因表达被明显抑制(P<0.01),5637细胞的增殖活力、迁移及侵袭能力均明显增强(P值均<0.01),然而顺铂诱导的5637细胞凋亡没有明显变化(P>0.05)。构建好的载体经菌落PCR法和sanger测序法鉴定,DNA序列无位点突变;将构建后的载体包装成病毒后能够感染靶细胞。结论:NBAT1表达水平可能与膀胱癌细胞的恶性程度有关。下调NBAT1基因的表达可以增强膀胱癌5637细胞的增殖活力,并促进细胞迁移及侵袭。慢病毒shRNA载体构建成功,并具有感染目的细胞的能力。
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