本文通过研究建立了一种针对金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析试纸条检测方法,并通过双纳米金信号放大系统降低了检测限,此方法被证明可用于快速检测食品中的金黄色葡萄球菌。通过诱导表达制得金黄色葡萄球菌的表面蛋白SdrD,将其作为抗原免疫新西兰白兔获得多克隆抗体,另一种抗体为鼠抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体。以双抗夹心法的原理建立胶体金试纸条检测方法,其中兔抗SdrD为检测抗体,与纳米金连接,鼠抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体作为捕获抗体,喷涂于NC膜T线的位置。所使用的胶体金颗粒的粒径为20nm;金标抗体连接的最佳pH值为8.5、最适抗体量为24 μg/mL;捕获抗体的包被浓度为0.6 mg/mL,二抗、金标抗体稀释倍数为1:00和1:5;选择MilliporeHF90s的硝酸纤维素膜作为固相载体;对NC膜采用浓度为2.5%BSA的PBS作为封闭处理液,封闭1h,对于金黄色葡萄球菌菌液的检测限为1.57×106 CFU/mL,与沙门氏菌、大肠0157:H7、阪崎肠杆菌、志贺氏菌不产生交叉反应,10 min得到检测结果。检测实际样品,前增菌8h,对当猪肉、鸡肉和牛奶中金黄色葡萄球菌的检测限可达到2.34×10 CFU/g(mL)。以粒径为30 nm的胶体金作为第二纳米金探针,用其标记羊抗兔二抗,形成双纳米金信号放大系统。可降低传统方法的检出限,对金黄色葡萄球菌菌液的检测限达到1.57×105CFU/mL。在对实际样品检测时也缩短了增菌时间,前增菌6h,对当猪肉、鸡肉和牛奶中金黄色葡萄球菌的检测限可达到2.34×10 CFU/g(mL)。本研究所建立的方法特异性好,操作简单,检测时间短,1Omin内出结果。可用于对食品中金黄色葡萄球菌污染情况的排查。