派琴虫(也称为帕金虫,英文名称Perkinsus)是影响世界海产贝类养殖和发展的主要病原之一,在世界各地广泛流行。其精典的检测方法为巯基醋酸盐培养基(FTM)培养,但该方法相对耗时,培养方法也比较复杂,仍需要其它辅助方法方可确定为阳性虫体。为了满足对派琴虫快速、准确的检测需求,本研究制备了派琴虫特异性抗原及其相应的特异性单克隆抗体,并在此基础上建立了派琴虫免疫荧光检测方法。根据GenBank公布的派琴虫CB5D4细胞壁蛋白基因序列设计并合成引物,成功扩增出派琴虫CB5D4基因,并运用分子克隆方法构建了派琴虫CB5D4-pMD19Tsimple质粒,将CB5D4基因与原核表达载体pET32a连接后,转入BL21(DE3)感受态细胞中获得表达菌种,经IPTG诱导并表达后,通过SDS-PAGE检测,结果表明,该基因编码的蛋白以可溶形式表达。将该蛋白纯化后免疫小鼠,运用单克隆抗体技术进行细胞融合、亚克隆、克隆、建株后,共筛选出6株抗派琴虫细胞壁蛋白的单克隆抗体细胞株,将该6株细胞分别命名为1E11、1B5、1B6、2A10、3B5和4E5,为相关免疫学检测方法的研究建立奠定了基础。将纯化的单克隆抗体标记FITC荧光素后,应用直接免疫荧光技术对试验室FTM培养的派琴虫及疑似感染派琴虫的蛤仔石蜡切片进行检测,成功建立了派琴虫免疫荧光检测方法。