油脂加工下脚料高效降解菌的筛选及特性研究

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我国每年油脂下脚料,总量在1000万吨以上,长期以来没有得以充分利用,而利用高产蛋白酶菌种降解油脂下脚料的是解决该问题较实用的方法,若能充分利用其营养物质,不但能很好的解决油脂工业下脚料污染问题,又可以很好的提高饼粕的综合开发利用,将有利于增加其经济和社会效益,并带动我国饼粕资源的快速发展。本论文从自然界搜集筛选高产蛋白酶菌种,对所筛选出三株高产蛋白酶的菌株进行鉴定,并以经过以大豆粕、菜籽饼、茶籽饼为基质的发酵研究,比较这些菌株对不同油脂下脚料的降解能力及其在不同油脂下脚料中的生长情况。此外,以摇瓶培养结果为依据,摸索细菌生长和产酶的规律,优化产酶条件,为其在农业上的生产应用提供理论和实验依据。首先运用常规方法观察细菌形态,并对20多种生理生化特征进行鉴定,根据《伯杰细菌鉴定手册》、《常见细菌系统鉴定手册》和《真菌鉴定手册》对菌种特征进行检索,为菌种分类到种并命名。为了摸索细菌生长和产酶规律,在摇瓶培养过程中了解细菌生长的最适养基及最佳培养时间,通过正交试验确定摇瓶培养条件的最佳配方。以发酵液中的单位蛋白酶活力和生物量为指标,并以大豆粕、菜籽饼、茶籽饼为基质的发酵研究,比较这些菌株对不同油脂下脚料的降解能力及其在不同油脂下脚料中的生长情况。1.在土壤样中分离到3株高产中性蛋白酶的菌株,命名为DB2、B1、Qm。通过鉴定,菌种DB2、B1属于芽孢杆菌属,具有耐盐、耐热、液化明胶、水解淀粉、可运动、好氧兼性厌氧等特点,与芽孢杆菌属中其他种相比较应该是两个新种,目前暂时将其命名为芽孢杆菌Bacillus sp DB2、Bacillus spB1。Qm为黑曲霉属,暂时将其命名为曲霉Aspergillus sp Qm。2.在土壤样中分离到3株高产中性蛋白酶的菌株,命名为DB2、B1、Qm,以发酵液中的单位蛋白酶活力和生物量为指标,利用该三株菌分别对大豆粕、菜籽饼、茶籽饼作为发酵基质进行了初步的降解蛋白能力比较研究,结果表明DB2、B1、Qm均能很好的降解三种粕中的粗蛋白。经初步鉴定DB2、B1为芽孢杆菌,Qm为曲霉。实验初步表明,同属的芽孢杆菌菌株对大豆粕、菜籽饼和茶籽饼的降解能力相近,芽孢杆菌和曲霉对大豆粕的降解能力相近,对菜籽饼的降解能力不同,对茶籽饼的降解能力相近。3.通过筛选得到的降解油脂下脚料优势菌进行培养条件的单因素试验和正交试验,确定了优势菌DB2的发酵的最佳培养基成分及最佳培养条件为:可溶性淀粉1%,大豆粕6%,氯化钙0.05%,磷酸二氢钾0.2%;温度35℃,初始pH 7,接种量为6%,转速180rpm,培养时间为48 h。在此条件下,蛋白酶活力可达到511.36 U/ml,生物量约为146.37×106cfu/ml。
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