【摘 要】
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目的:观察四君子汤是否通过通过改善线粒体凋亡信号通路发挥对脾气虚型大鼠视网膜脱离（Retinal Detachment,RD）复位后感光细胞的保护作用。方法:将成年Spregue-Dawley（SD）大鼠52只随机分为对照组（A组）、RD自动复位组（B组）、脾气虚RD自动复位组（C组）、四君子汤治疗脾气虚RD自动复位组（D组）,剩余4只大鼠进行线粒体膜电位阳性对照检测。C、D组使用破气耗气加饥饱失
【基金项目】
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陕西省自然科学基础研究计划上项目（NO.2015JM8408）； 陕西省中医管理局中医药科研课题面上项目（NO.JCMS063）； 西安市人民医院（西安市第四医院）院内科研孵化基金项目（NO.FZ-26）；
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目的:观察四君子汤是否通过通过改善线粒体凋亡信号通路发挥对脾气虚型大鼠视网膜脱离（Retinal Detachment,RD）复位后感光细胞的保护作用。方法:将成年Spregue-Dawley（SD）大鼠52只随机分为对照组（A组）、RD自动复位组（B组）、脾气虚RD自动复位组（C组）、四君子汤治疗脾气虚RD自动复位组（D组）,剩余4只大鼠进行线粒体膜电位阳性对照检测。C、D组使用破气耗气加饥饱失常法制备脾气虚证动物模型,于实验开始6周B、C、D组采用视网膜下注射0.1%透明质酸钠的手术方法制备RD自动复位模型,D组使用四君子汤灌胃治疗。8周（术后2周）及9周（术后3周）随机分批处死动物取材。实验过程中记录并比较大鼠进食量、体重及大鼠精神状态;于实验开始时、6周、8周及9周分别测定大鼠血清D-木糖值及红细胞膜Na+-K+-ATPase活性评估脾气虚证模型;制备眼球石蜡切片进行HE染色测定视网膜外核层厚度/内核层厚度、TUNEL染色观察视网膜外核层凋亡指数、免疫荧光染色观察AIF及Cyt C在视网膜组织中表达的位置。提取视网膜组织,利用JC-1荧光探针测定视网膜组织线粒体膜电位（Mitochondrial transmembrane potential,ΔΨm）水平、Western Blot分析其Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达量,提取视网膜组织中的细胞核,Western Blot检测AIF蛋白表达量变化。结果:实验开始时各组大鼠进食量、体重、血清D-木糖值及红细胞膜Na+-K+-ATPase活性比较差异无统计学意义（P>0.05）。6周C、D组大鼠与A、B组相比,体重、进食量、血清D-木糖值及红细胞膜Na+-K+-ATPase活性明显降低（P<0.05）,C组上述症状持续至实验结束,D组至9周时血清D-木糖值与A组比较差异无统计学意义（P>0.05）、红细胞膜Na+-K+-ATPase活性及进食量较C组明显升高（P<0.05）。8周B、C、D组视网膜外核层厚度/内核层厚度比较差异无统计学意义（P>0.05）,但与A组比较明显降低（P<0.05）;至9周D组视网膜外核层厚度/内核层厚较C组明显升高（P<0.05）。8周B、C、D组视网膜外核层凋亡指数较A组明显升高（P<0.05）;C、D组较B组明显升高（P<0.05）;至9周,D组较C组明显降低（P<0.05）。8周C、D组视网膜ΔΨm比较差异无统计学意义（P>0.05）;C组与较B组明显下降（P<0.05）,9周D组视网膜ΔΨm较C组显著升高（P<0.05）。8周及9周A、B组视网膜组织Bax蛋白含量比较差异无统计学意义,C组视网膜组织Bax蛋白含量较A组显著升高,9周D组视网膜组织Bax蛋白含量较C组明显降低（P<0.05）;8周及9周,各组视网膜组织Bcl-2蛋白表达量比较差异无统计学意义;8周及9周B、C组视网膜组织Caspase-3蛋白表达较A组显著升高（P<0.05）,C组视网膜组织Caspase-3含量较B组显著升高（P<0.05）,D组视网膜组织Caspase-3含量较C组显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光结果显示B、C、D组AIF及Cyt C较A组着色弥散,其中B组AIF特异性表达于少量外核层细胞核;C组AIF及Cyt C在外核层特异性着色显著;D组AIF及Cyt C在外核层部分细胞着色。结论:四君子汤能通过抑制线粒体凋亡信号通路,减少脾气虚RD复位后感光细胞凋亡的发生,发挥神经保护作用。
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