【摘 要】
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[研究目的]:本课题以蒙医温针疗法CCI模型大鼠的抗炎、抗氧化相关细胞信号通路NF-kB信号通路与Nrf2信号通路为切入点,观察疼痛行为学相关指标,并对血清炎症相关细胞因子及抗氧化相关酶的含量变化与细胞形态学变化进行观察,探讨蒙医温针疗法对坐骨神经痛的抗炎、抗氧化作用的生物学基础,阐明蒙医温针疗法对坐骨神经痛治疗的抗炎、抗氧化作用的细胞信号通路层面的复杂机制。同时结合蒙医整体理论中的内外环境平衡及
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[研究目的]:本课题以蒙医温针疗法CCI模型大鼠的抗炎、抗氧化相关细胞信号通路NF-kB信号通路与Nrf2信号通路为切入点,观察疼痛行为学相关指标,并对血清炎症相关细胞因子及抗氧化相关酶的含量变化与细胞形态学变化进行观察,探讨蒙医温针疗法对坐骨神经痛的抗炎、抗氧化作用的生物学基础,阐明蒙医温针疗法对坐骨神经痛治疗的抗炎、抗氧化作用的细胞信号通路层面的复杂机制。同时结合蒙医整体理论中的内外环境平衡及白脉,赫依的运行规律阐释其与现代医学细胞信号通路运行规律的相似性。[研究方法]:（1）制作模型:SPF级SD雄性大鼠60只随机分成CCI模型组,假手术组,温针组,针刺组,西药组,每组15只。按照Bennett Xie法制作CCI模型,即选择右侧坐骨神经分离7mm左右,使用4-0手术缝合线对坐骨神经进行4段结扎（每段隔1mm距离）,总长达4-5 mm,结扎结束后进行消炎缝合完成模型制作。假手术组大鼠只进行暴露坐骨神经后缝合,不结扎,其余组均制作CCI模型。（2）治疗方法:制作模型15天后开始进行各组相应治疗,即CCI模型组与假手术组不给予任何治疗;温针组大鼠给予肾穴与髋穴进行温针治疗15分钟/天,治疗15天;西药组大鼠给予布洛芬混悬液（0.3g*kg-1）灌胃治疗,治疗15天;针刺组大鼠给予肾穴与髋穴针刺治疗15分钟/天,治疗15天。（3）疼痛行为学观察:造模完成后各组大鼠分别于3,7,15,21,30天观察各组大鼠体重增长变化并检测各组大鼠机械刺激痛阈值（mechanileal withdrawal threshold,MWT）值与热缩腿反射潜伏期（thermal withdrawal lateney,TWL）等进行疼痛行为学评价。即将大鼠置于有机玻璃盒预适应30min,以不同力度的Von Frey纤毛刺激大鼠足底,按照升序的序列从0.2g开始,以纤毛稍稍弯曲成S形作为标准,持续刺激8s,连续10次,每次至少间隔10s。直到每10次测试中有5次以上抬腿,能够引起50%次抬腿的最低VonFrey纤毛的克数计为MWT值。大鼠放置于热板仪内安静状态下,给予造模侧（右侧）爪底热刺激（IR=60）,记录从开始给予热刺激至出现缩足逃避反射时间（s）,重复3次,间隔10min,取平均值作为TWL值。（4）酶联免疫法（ELISA）:治疗结束后各组取10只大鼠腹主动脉抽血,采用酶联免疫法（ELISA）测定血清炎症相关因子,即致炎因子白介素1-β（IL-1β）,抑炎因子白介素-4（IL-4）与氧化应激相关酶与代谢物,即清除自由基相关酶即超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽（GSH）,过氧化氢酶（CAT）,丙二醛（MDA）等的含量。（5）用蛋白质免疫印迹法（Western Blot）各组取3只大鼠坐骨神经2cm,采用蛋白质免疫印迹法（Western Blot）测定各组大鼠核因子kB（NF-kB）信号通路相关蛋白IkB、p-IkB、NF-kB及核转录因子（Nrf2）信号通路相关蛋白Keap1、Nrf2、HO-1的表达变化。（6）免疫组化法观察各组5只大鼠背根神经节（DRG）细胞形态学,即交感神经芽生-篮状结构变化。[结果]:（1）疼痛行为学检测显示:温针组与CCI模型相比较,造模后21,30天体重明显增长,有显著差异（p<0.05）;造模后30天MWT明显下降,有显著差异（p<0.05）;造模后21,30天TWL值明显下降,有显著差异（p<0.05）。（2）酶联免疫法（ELISA）测定结果显示:温针组与CCI模型相比较,温针组血清致炎因子IL-1β明显降低,有显著差异（p<0.05）,抑炎因子IL-4明显升高,有显著差异（p<0.05）,SOD明显升高,有显著差异（p<0.05）,MDA明显降低,有显著差异（p<0.05）,GSH,CAT无明显改变,无显著差异（p>0.05）。（3）蛋白质免疫印迹法（Western Blot）测定结果显示:温针组与CCI模型组相比较,NF-kB信号通路IkB蛋白表达明显上调,有显著差异（p<0.01）,p-IkB蛋白表达明显下调,有显著差异（p<0.05）,NF-kB蛋白表达明显下调,有显著差异（p<0.05）;温针组与CCI模型组相比较,Nrf2信号通路Keap1蛋白表达明显上调,有显著差异（p<0.01）,Nrf2蛋白表达明显下调,有显著差异（p<0.01）,HO-1蛋白表达明显上调,有显著差异（p<0.05）（4）免疫组化法结果显示:温针组与CCI模型组相比较,背根神经节（DRG）交感神经芽生-篮状结构的细胞数明显减少。[结论]:（1）蒙医温针疗法可缓解CCI模型大鼠由机械性刺激与热刺激引起的异常痛觉作用。（2）蒙医温针疗法可能通过调节CCI模型大鼠血清炎性因子及抗氧化酶的的释放,起到抗炎、抗氧化作用。（3）蒙医温针疗法可能通过抑制CCI模型大鼠坐骨神经组织的NF-kB信号通路大量激活,从而起到抗炎作用。蒙医温针疗法可能通过银针的还原性特性,起到对CCI模型大鼠坐骨神经组织的抗氧化作用,减少了 Nrf2信号通路的激活。（4）蒙医温针疗法抗炎、抗氧化及镇痛作用明显且安全、无副作用,可广泛用于坐骨神经痛的临床治疗。（5）现代医学中蒙医温针疗法对CCI大鼠血清的作用及坐骨神经组织内相关信号通路蛋白表达的调节作用与蒙医理论中“调和赫依、血相搏”与“通白脉”的作用具有相似性。
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