球孢白僵菌Mars发酵牛奶产生紫红色物质的初步研究

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本实验室分离到一株丝状真菌Mars,经鉴定Mars菌株属于白僵菌属中的球孢白僵菌。前期实验发现Mars菌株在牛奶培养基中培养后,可使培养基中出现紫红色物质。本实验研究了球孢白僵菌Mars菌株形成紫红色物质的培养基以及培养条件,并对这种紫红色物质进行了初步的分离和稳定性研究。分别用查氏固体培养基、马铃薯琼脂葡萄糖固体培养基、牛乳固体培养基培养Mars菌株。28℃培养15d后,发现没有紫红色物质产生。Mars菌株再分别于查氏液体培养基、马铃薯琼脂葡萄糖液体培养基、牛乳液体培养基中培养,28℃培养15d后,发现只有在牛乳液体培养基中才有紫红色物质产生。球孢白僵菌标准菌株3.4428在牛乳液体培养基中28℃培养15d后,发现没有紫红色物质产生。结果表明:在本实验所选择的培养基范围内,牛乳液体培养基是唯一的能使球孢白僵菌Mars菌株产生紫红色物质的培养基。分别测定了球孢白僵菌Mars菌株发酵牛奶产生紫红色物质的最佳温度和pH值。将球孢白僵菌Mars分别放在18℃、23℃、28℃、33℃和38℃的培养箱中培养,每隔5d观察并记录Mars菌株在不同温度下的生长和产生紫红色物质的情况。再用1mol/LNaOH溶液和乳酸调节牛乳液体培养基pH为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5,接种后放在28℃的培养箱中培养,每隔5d观察并记录Mars菌株在不同pH条件下的生长和产生紫红色物质的情况。结果表明:28℃为Mars菌株发酵牛奶产生紫红色物质的最佳温度,pH在6.0-7.0的范围内Mars菌株能够产生大量的紫红色物质。实验使用有机溶剂萃取法对球孢白僵菌Mars发酵牛奶产生的紫红色物质进行了初步分离纯化。将牛乳发酵液进行离心处理后,用不同萃取剂对沉淀进行萃取,最后用紫外分光光度计进行扫描,结果表明:沉淀萃取液在330nm左右有吸收峰且丙酮为最佳萃取剂;上清液在500nm左右有吸收峰。初步研究了Mars菌株产生的紫红色物质的稳定性。取沉淀萃取液和上清液,分别放于25℃、40℃、60℃、80℃的恒温水浴中2h,用分光光度计在其最大吸收波长处测定吸光度。取上清液并将pH值调到2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13,放置12h,用分光光度计在其最大吸收波长处测定吸光度。取沉淀萃取液和上清液,分别放在日光灯、室内自然光和黑暗处,每隔一定时间测定吸光度。结果表明:沉淀色素和上清色素在25℃~80℃温度范围内吸光度值几乎没有变化,色素比较稳定;酸性条件下上清色素较稳定,而碱性条件下上清色素不稳定。黑暗处和室内自然光对沉淀色素和上清色素的稳定性几乎没有影响;阳光直射对上清色素的稳定性影响较小,而对沉淀色素的稳定性影响较大。
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