论文部分内容阅读
胶质母细胞瘤(glioblastoma)或称多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM),在胶质瘤中恶性程度最高,预后极差,目前各种治疗方法的效果均不理想。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand, TRAIL)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族中的一员,它能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,而对正常组织和细胞无明显毒性作用,这一特性使之成为肿瘤治疗研究中的热点。然而,在脑肿瘤研究中已证明,绝大部分GBM对TRAIL诱导凋亡发生抵抗,但其抵抗的分子机制目前尚不清楚。本实验采用体内实验与体外实验相结合的方法,应用细胞培养、酶联免疫吸附试验、流式细胞术、免疫磁珠分选、免疫荧光化学、Western blot及在体动物实验等技术,研究GBM单克隆细胞株对TRAIL诱导凋亡的敏感性,观察TRAIL凋亡蛋白表达及经TRAIL诱导各细胞株发生凋亡级联裂解反应。建立GBM肿瘤干细胞研究体系,研究GBM干细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性及TRAIL凋亡蛋白的表达情况。本研究旨在探讨GBM及其干细胞抵抗TRAIL诱导凋亡的分子机制,为脑肿瘤的治疗提供实验依据。本研究结果表明,GBM单克隆细胞株经TRAIL处理后可诱导凋亡,敏感细胞株半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)表达增高;而抵抗细胞株Caspase-8表达降低或不表达。敏感细胞株经TRAIL作用后引起Caspase-8、-3、-9及DFF-45裂解,抵抗细胞株不发生裂解。研究证明GBM干细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性降低,表达Caspase-8量减少;加入顺铂后GBM干细胞对TRAIL敏感性明显增加;加入Caspase-8抑制剂Z-IETD、Caspases广泛抑制剂Z-VAD后,可抑制GBM干细胞对TRAIL诱导的凋亡反应。这些结果表明,在GBM及其干细胞抵抗TRAIL诱导凋亡研究中,Caspase-8表达起重要作用,与TRAIL诱导凋亡抵抗有一定相关性,为脑肿瘤的治疗提供了新的理论依据。