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研究目的通过对男性原发不育患者的染色体核型以及Y染色体基因微缺失的分析研究,寻找男性原发不育的遗传学依据,以及中国男性原发不育患者AZF基因突变的热点,为临床进行男性不育的诊断、治疗以及辅助生殖技术提供相应的理论依据和技术支持。方法和材料以2008-2011年于天津市中心妇产科医院就诊的无精子症或是少精子症患者83例为研究对象。所有患者均按照世界卫生组织(WHO)推荐的方法和诊断标准加以确诊,并排除内分泌失调、输精管阻塞、隐睾等因素。对所有研究对象进行外周血染色体核型分析,将83例患者分成染色体核型正常组和染色体核型异常组。抽取患者2ml EDTA抗凝外周血,采用酚-氯仿的方法提取DNA并保存于-20℃备用。与大多数研究通常选用AZF区6-12个位点进行检测不同,在本研究中选取15个位点进行研究,包括AZFa区的sY82, sY84, sY86, AZFb区的sY124、sY127、sY128、sY133、sY134、sY143, AZFc区的sY239、sY242、sY254、 sY255,AZFd区的sY145、sY152。将这15个位点组成4套多重PCR系统,分别为系统Ⅰ:SRY, sY254、sY143、sY242、sY255,系统Ⅱ:SRY, sY84、sY239、 sY152,系统Ⅲ:SRY, sY86、sY127、sY145、sY124,系统Ⅳ:SRY, sY134、 sY82、sY128、sY133。为排除假阳性的结果,在每套系统中以SRY基因作为内对照,同时以空白和健康男性作外对照。结果1.DNA提取的质量用酚-氯仿的方法提取所有研究对象的外周血DNA, DNA的浓度在44.61ng/μl～(96.2±8.6ng/μl), A260/280在1.65-1.85之间。2.13例异常染色体核型分析在83例患者中有13例患者存在染色体核型的异常,其中7例为无精子症患者,核型分别为：3例47,XXY；1例45,XY, rob (13;21)(p10; q10);1例45,XY, rob (14;15) del (Y)(pter→q11.2);1例48,XXYY;1例46,XY,inv(9)(p11ql2),21pss,15p+。6例为少精子症患者,核型分别为：2例47,XXY：1例46,XY,del(Y)(q11.23);1例46, XY, t (6;22)(q15; p11);1例46,XY,t (15,22)(q11.2, q11.2);还有1例患者染色体核型为46,XY,t(4；18)(q35；q11.2)。3.微缺失发生的区域在染色体核型正常的70例无精子症及少精子症患者中共有8例AZF的微缺失,总缺失率为11.4%(8/70)。其中无精子症患者共32例,有4例有AZF的微缺失,缺失率为12.5%(4/32)；少精子症患者共38例,有4例有AZF微缺失,缺失率为10.5%(4/38)。在有AZF微缺失的8例患者中,5例有AZFc的微缺失,4例有AZFb的微缺失,3例有AZFa的微缺失,1例有AZFd的微缺失。4.染色体正常患者微缺失发生的位点8例有微缺失的病例中包含了14个位点的缺失,其中1例是AZFb+AZFc+AZFd的微缺失,缺失位点包括sY124、sY127、 sY128、sY133、sY134、sY143、sY145、sY152、sY239、sY242、sY254、sY255,占缺失病例的12.5%(1/8)；1例是AZFb+AZFc的微缺失,缺失位点为sY254、 sY134,占缺失病例的12.5%(1/8)；1例是AZFa+AZFb+AZFc的微缺失,缺失位点为sY254、sY134、sY82,占缺失病例的12.5%(1/8)；2例是AZFa的微缺失,缺失位点为sY84,占缺失病例的25.0%(2/8)；1例是AZFb的微缺失,缺失位点为sY127,占缺失病例的12.5%(1/8)；2例是AZFc的微缺失,缺失位点为sY254,占缺失病例的25.0%(2/8)。在8例AZF微缺失的患者中未检测到sY86的缺失。5.对1例46, XY, Yqh-的检测该患者的染色体核型为46, XY, del(Y)(q11.23),临床表现为少精子症,通过Y染色体基因微缺失的检测发现该患者存在sY254(AZFc)和sY134(AZFb)的缺失。结论(1)染色体异常是引起男性原发不育的一个重要因素,对不育男性常规进行外周血染色体核型分析既可以帮助病人寻找不育的遗传因素,也可以减少患者将变异染色体传给后代的几率,降低染色体异常患儿出生的机率。(2)在本研究中男性原发性无精子症和少精子症的患者中AZF基因微缺失率高达11.4%,说明对于此类患者特别是寻求辅助生殖技术的患者应常规做Y染色体基因微缺失的检测；同时也说明本研究选取的15个STSs位点涵盖了中国人群Y染色体微缺失的热点,可以作为基因检测的靶位点。(3)对有遗传病家族史的人群,在怀孕前应进行产前咨询,在怀孕期间应根据个人情况进行绒毛或羊水的产前染色体及基因诊断,降低遗传病患儿出生的机率。