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1乙醇脱氢酶2和乙醛脱氢酶的表达及酶学性质分析酿酒酵母中的乙醇脱氢酶2催化乙醇氧化生成乙醛,乙醛脱氢酶催化乙醛氧化生成乙酸。本研究从酿酒酵母基因组中分别克隆、表达乙醇脱氢酶2和乙醛脱氢酶,对其进行了纯化,然后体外测定酶活及酶动力学分析。为研发新型解酒食品提供理论基础。主要内容如下：1.1从酿酒酵母基因组DNA扩增获得6种酶的基因并构建了6个表达载体,pRX2-ADH2、pRX2-ALDH6、pRX2-ALDH2、pRX2-ALDH3、pRX2-ALDH4和pRX2-ALDH5,分别转化E.coli BL21,通过乳糖自诱导表达目的蛋白,6种酶得到成功表达,但ADH2和ALDH4主要以包涵体形式表达；1.2重新构建3个表达载体,pGEX-ADH2, pBAD-ADH2和pBAD-ALDH4,优化表达条件,初步判断ALDH4以可溶性形式表达,ADH2仍然以包涵体形式表达;1.3采用Ni-NTA His.Bind Resin亲和层析柱纯化带有6His·Tag的重组蛋白,纯化后经SDS-PAGE检测日的蛋白的纯度约为90%;采用Bradford蛋白测定法测得ADH2、ALDH6、ALDH2、ALDH3和ALDH5浓度分别为2.07mg/mL,1.624mg/mL,0.6635 mg/mL,0.7596 mg/mL(?)0.9615 mg/mL;1.4体外测定复性后的ADH2和纯化得到的乙醛脱氢酶活性,通过紫外可见分光光度计测定产物β-NADH和(3-NADPH的生成量,结果显示ADH2、ALDH6、ALDH2、ALDH3和ALDH5的比活力分别约为2.107U/mg,16.86 U/mg,1.416U/mg,1.566U/mg和2.742U/mg；1.5研究温度、pH值和金属离子对ADH2和乙醛脱氢酶活力的影响。得出ADH2、ALDH6、ALDH5、ALDH2和ALDH3最适温度分别为45℃,30℃,37℃,37℃和50℃,最适pH值分别为7.4,7.4,8.0,7.4和8.5。1.6研究ADH2和乙醛脱氢酶酶动力学性质。ADH2对NAD+和乙醇的Km分别为1.1 mM和120μM, ALDH6和ALDH5对NADP+和乙醛的Km分别为(101μM,42μM)和(664μM,129μM), ALDH2和ALDH3对NAD+和氨基丙醛的Km分别为(471μM,17.5μM)和(410μM,8.6μM)。2两种抗菌肽的克隆、表达及活性分析将两种水生动物分泌的抗菌肽丛因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建了pGEX-Y18和pGEX-CEC1两个融合蛋白表达载体,转化至表达宿主菌Escherichia coli Rosetta中进行表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。融合蛋白经复性、酶切处理获得抗菌Y18和CECl。抑菌实验结果表明,融合蛋白GST-Y18和GST-CEC1、抗菌肽Y18和CECl都能有效地抑制E.coli DH5α、Bacillus subtilis、Staphyloccocus aureus Rosenbach和Saccharomyces cerevisiae的生长。为后续的将抗菌肽基因序列串连单体的形式高量表达实验奠定了良好的基础。