目的 通过观察预吸氧和应用吡那地尔对大鼠缺氧复氧性脑损伤的影响，探讨预吸氧和ATP-敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channels，K_ATP)在缺氧复氧性脑损伤中的作用及其机理。 方法 1．实验分组 健康Wistar大鼠42只，雌雄不拘，体重230～300克，按随机的原则平均分成7组： Ⅰ组，假手术组（对照组）：脑室内注射（icv）0.1％DMSO 10ul； Ⅱ组，单纯缺氧-复氧组：缺氧30min，复氧60min； Ⅲ组，吡那地尔-缺氧-复氧组：预先icv吡那地尔10 ul，30min后按Ⅱ组进行； Ⅳ组，格列本脲-吡那地尔-缺氧-复氧组：预先icv格列本脲10ul，20min后按Ⅲ组进行； Ⅴ组，预吸氧-缺氧-复氧组：预吸氧30min后按Ⅱ组进行； Ⅵ组，吡那地尔-预吸氧-缺氧-复氧组：预先icv吡那地尔10ul，30min后按Ⅴ组进行； Ⅶ组，格列本脲-预吸氧-缺氧-复氧组：预先icv格列本脲10ul，30min后按Ⅴ组进行； 2．预吸氧、缺氧及复氧实验 2．1．预吸氧实验：将大鼠置于100cm×100cm×100cm的氧舱里（内放钠石灰太经进气孔吹人纯氧，调节氧浓度，使之维持恒定在95± 2％，持续 30min。 2．2．缺氧实验：将大鼠置于氧浓度为6± 2％的上述氧舱内持续30 Inn。 2．3．复氧实验：将大鼠置于氧浓度为95±2％的上述氧舱内持续60min。 3．标本检测方法 3．1．线粒体膜流动性测定：荧光偏振法 3．2．线粒体NOi生成量测定：硝酸还原法 3．3．c一fos和血红素氧合酶一l（Hem啊genase一l，HO一二）的检测及结果判定 检测方法：采用免疫组织化学染色测定法门ABC法） 结果判定：采用病理图像分析仪，。－fOS阳性细胞为胞核有棕黄（褐）色颗粒者，HO一二阳性细胞为胞浆和／或胞核有棕黄（褐）色颗粒者。每例切片分别取3个高倍视野（X400L选用同批染色切片在Metarnorph／Dplo／B61型真彩色病理图像分析系统下测定阳性信号所占各自面积的百分比（面密度）rea（％）指征阳性信号表达的范围。每一切片测量3个视野，求其平均值。 3．4．组织学观察 切片HE染色，在100倍或400倍光镜观察。切片丙酮梯度脱水，EPons 12包埋，LKB超薄切片机切片，铅铀双重染色，Pilips cmlo透射电镜下观察。 4．统计学处理 数据均以均数上标准差K。S）表示。用＊区别＊＊软件行统计分析，组间差异用单因素方差hne－wsy ANOVA)分析，MD检验。P＜0．05为差异显著，P＜0．of为差异非常显著。 ·2· 结 果 1．预吸氧对缺氧复氧性脑损伤的影响 11组与1组以及V组与11组相比，线粒体NO含量明显增加。膜流动性显著降低。11组与二组相比，C－fos刀O一表达明显增加J组与 11组相比，C－fOS表达增高而 HO一二降低，均有显著性差异（P＜O．01）。 2．毗那地尔对缺氧复氧性脑损伤的影响 与 1组相比，11组线粒体NO含量明显增加、膜流动性显著降低。与11组相比，皿组上述指标明显恢复，接近于 1组。11组与 1组相比，C－fos刀O一二表达明显增加，皿组与11组相比，C－fOS和＊0J表达均降低，差异非常显著p＜0．0门。 3．预吸氧对缺氧复氧性脑损伤K＿的影响 与 V组相比＊组线粒体膜流动性增加，而 C－fos蛋白表达和 NO含量明显下降。上述指标在Vll组与 V组之间则无显著差异（＞0．05）。 4．光镜观察结果 假手术组的神经细胞形态结构正常，胞浆丰富、均匀淡染，核圆形或椭圆形，核仁明显。缺氧一复氧组的细胞肿胀，核浆分界不清，核仁不清，细胞周围中度水肿。毗那地尔一缺氧一复氧组的大部分神经细胞轻度肿胀、结构基本正常，核仁清楚，细胞周围轻度水肿。预吸氧一缺氧一复氧组的大部分细胞肿胀、结构不清，核仁模糊，其细胞周围中度水肿。 5．电镜观察结果 假手术组的胞浆内线粒体结构清楚，峪排列规整，细胞核呈圆形，核膜结构清晰。缺氧一复氧组的线粒体轻度肿胀，外膜部分模糊，崎内腔扩大，核形状不规则，部分溶解。毗那地尔一缺氧一复 ·3·氧组的线粒体结构基本正常，部分肿胀，基质减少，峪排列稍不规则，但内膜大部分完整。预吸氧一缺氧一复氧组的线粒体肿胀，呢减少、断裂用列紊乱。 结、论 1．缺氧复氧可造成大鼠脑皮质神经元损伤，使C—fos和HO则表达增高，线粒体NO含量增加，线粒体膜的流动性降低。 2．100％浓度预吸氧可使大鼠脑皮质神经元缺氧复氧后损伤加重，C－fOS表达和线粒体NO含量进一步增加，线粒体膜的流动性进一步降低以及HO－1表达降低。 3．毗那地尔可减轻大鼠脑皮质神经元缺氧复氧后损伤，对缺氧复氧引起的皮质C－fOS和HO一二表达增加、线粒体NO含量增加和膜流动性降低有抑制作用；对预吸氧缺氧复氧引起的皮质C－fos表达和线粒体NO含量的增加以及线粒体膜流动?