嵌合抗体chA21是由本实验室构建的一株抗p185/Her2的工程化人-鼠嵌合抗体,对p185/Her2高表达的肿瘤具有明显的抑制活性。与另一株已用于临床的抗p185/Her2抗体药物Herceptin相比,chA21在抗原亲和力和抗体免疫原性方面还有一些不足。为了使其更适用于肿瘤治疗,我们基于蛋白结构模拟对chA21进行了亲和力改造和人源化改造的研究。我们通过计算设计点突变的方法对A21的亲和力进行了改造。首先我们通过点突变扫描,精确化了A21的抗原识别表位,并建立了新的抗体互补决定区(CDR)的分类方法,用这种新方法对抗体A21的各CDR区内的参与抗原识别的位点进行了预测。在这些分析结果基础上,通过计算机分子对接模拟,更精细地揭示了A21和Her2的相互作用模式,并通过计算预测,设计了改造抗体A21的抗原亲和力的点突变方案并进行了初步实验验证。另外,我们结合分子对接模拟和之前的活性测定结果,从结构角度阐述了A2l的识别表位与其肿瘤抑制机制的相关性。为了降低嵌合抗体chA21的免疫原性,我们通过CDR移植的方法对其鼠源可变区进行了人源化改造。基于A21可变区的序列和结构信息,选择人源化抗体huCC49作为其人源化模板进行抗原结合区移植,基于移植之后人化抗体的模拟结构,对一些重要的框架区残基进行突变方向的筛选,选择更符合抗体结构稳定需要的突变方向,得到A2l的人源化变体H1、H1-1、H1-2的序列。在293T真核表达系统中对Fc融合的人源化变体进行表达,亲和力分析结果表明,与嵌合抗体A21相比,设计的A21人源化抗体H1、H1-1、H1-2与抗原的亲和力相近,并已经达到了完全的人源化,具有更好的临床应用前景。